Sur la mise au point de dosage immuno-enzymatiques de pesticides à l'aide d'anticorps monoclonaux : le cas de la deltaméthrine

On the development of immunoassay of pesticides using monoclonal antibodies. The deltamethrin's example

• Auteur / Autrice : Anne-Laurence Queffélec
• Direction : Bernard Corbel
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1995
• Etablissement(s) : Brest

Mots clés

Mots clés contrôlés

Deltaméthrine

Technique immunoenzymatique

Pesticides

Résumé

Les pesticides sont de petites molecules qui ne sont pas immunogenes. Des analogues structuraux de trois pesticides, le carbaryl, le carbofuran et la deltamethrine ont ete synthetises par addition d'une chaine laterale d'une longueur de trois a quatre carbones se terminant par une fonction acide carboxylique, afin de les coupler aux residus lysine des proteines. Les haptenes derives des carbamates ont ete obtenus par acylation du noyau aromatique par reaction de freidel-crafts. En ce qui concerne le carbaryl l'acylation du 1-hydroxynaphtalene par l'anhydride succinique se fait en position para du groupement hydroxy ; pour le carbofuran le 2,3-dihydro-2,2-dimethyl-7-benzofuranol est acyle sur le c#5. Les cetones aromatiques obtenues sont ensuite reduites. En ce qui concerne la deltamethrine le bras de liaison est introduit au debut de la synthese de la partie alcool. Les diastereosisomeres sont ensuite purifies par clhp. Les haptenes derives de la deltamethrine sont couples a la bsa et a l'ovalbumine. Des hybridomes sont produits par fusion de cellules de rate d'une souris immunisee avec le conjugue bsa-del et des cellules de myelome de souris. Apres detection par un test elisa indirect, plusieurs hybrides ont ete selectionnes et clones. Les anticorps monoclonaux obtenus ont ensuite ete utilises pour doser la deltamethrine dans un test elisa direct et indirect en competition. Sur l'ensemble des anticorps retenus, les deux donnant les meilleurs resultats dans le cadre du dosage de la deltamethrine, del 01 et del 02, sont utilises pour affiner le dosage. Les concentrations en deltamethrine donnant une inhibition de la reponse de 50% sont de 500 ng. Ml#-#1 pour un test elisa indirect et 8 000 ng. Ml#-#1 pour un test elisa direct. Une etude des reactions croisees a montre que l'epitope reconnu par les anticorps del 01 et del 02 comprend le groupement cyano ainsi que la partie dibromovinylcyclopropane, elements caracteristiques de la deltamethrine