Etude des glycoproteines par spectrometrie de masse avec ionisation electrospray

Glycoproteins studied by electrospray ionization mass spectrometry

• Auteur / Autrice : GILBERT HEGY
• Direction : VAN DORSSELAER
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

Cette these montre l'interet et l'importance de la spectrometrie de masse avec ionisation electrospray pour l'etude d'une modification post-traductionnelle qui est souvent tres heterogene: la glycosylation des proteines. La partie bibliographique se compose de trois chapitres dans lesquels sont abordees tour a tour: l'importance des glycosylations dans les fonctions biologiques, les methodes classiques de l'analyse des glucides et les differentes techniques de spectrometrie de masse appliquees a l'analyse des glycoconjugues et en particulier a celles propres aux glycoproteines. Dans la partie resultats nous presentons une strategie generale d'etude des glycoproteines. Elle repose sur une approche globale dans laquelle nous mesurons l'heterogeneite de la glycoproteine entiere ou partiellement deglycosylee a l'aide de traitements chimiques et enzymatiques, et sur une approche locale dans laquelle nous determinons la distribution des oligosaccharides propres a chaque site de glycosylation. Cette derniere approche presente de nombreux interets, dont entre autres, celui de fournir une representation qualitative et quantitative des structures glucidiques portees par chaque site de glycosylation. Nous avons applique cette strategie a la caracterisation structurale de quatre types differents de glycoproteines par spectrometrie de masse electrospray. Il s'agit de la ribonuclease b, de la prothrombine humaine et de rat, de la fsh humaine naturelle et recombinante ainsi que des peptides o-glycosyles anti-bacteriens d'insectes. Le recoupement des resultats obtenus par ces deux approches nous a permis d'etudier la maniere dont les oligosaccharides s'apparient sur la sous-unite de la fsh humaine naturelle et recombinante. Cette demarche nouvelle et originale a ete developpee afin de faire le lien entre d'une part, la structure et l'appariement des oligosaccharides et d'autre part les differences d'activite biologique. Le nouvel outil analytique que nous avons developpe permettra dans un proche avenir de determiner l'importance des glycosylations dans la formation de complexes proteiques supramoleculaires tels que ceux des hormones hypophysaires