Hepatocytes immobilises : preparation, conservation et maintien de fonctions differenciees

Immobilized hepatocytes: preparation, preservation and expression of differentiated functions

• Auteur / Autrice : CLAIRE NORMAND
• Direction : André Guillouzo
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Rennes 1

Résumé

Les hepatocytes isoles en suspension et surtout en culture primaire sont aujourd'hui largement utilises dans les domaines les plus divers et notamment en pharmacologie et en toxicologie. Leur emploi pour traiter l'insuffisance hepatique fait l'objet de nombreux travaux. Toutefois, en suspension les hepatocytes ne survivent que pendant quelques heures et en culture monocouche, ils montrent des alterations phenotypiques precoces qui atteignent preferentiellement les fonctions differenciees. L'objectif de notre travail a ete de mettre au point un protocole d'immobilisation dans un gel d'alginate applicable aux hepatocytes de diverses especes, d'evaluer l'influence de l'hypothermie et de la decongelation sur la survie et les fonctions de ces cellules immobilisees et de les utiliser pour developper une foie bioartificiel extracorporel. Pieges dans de l'alginate qui forme un hydrogel en presence d'ions calcium, les hepatocytes ne manifestent pas une reduction de viabilite et retiennent des fonctions differenciees a des niveaux satisfaisants pendant quatre jours. Les hepatocytes sont immobilises a raison de 250-350 cellules par gouttelettes ou billes d'alginate de 0,7 a 0,9 mm de diametre. De meme, l'immobilisation n'affecte pas la survie en hypothermie pendant 48 heures dans la solution de l'universite de wisconsin, solution utilisee pour la conservation d'organes en vue de leur transplantation ou de leur dissociation, comme nous l'avons montre a partir de foies de rat. Les hepatocytes immobilises, tout comme les hepatocytes en suspension, peuvent etre stockes a 4c pendant au moins 48 heures dans le milieu de leibovitz l15 additionne ou non de polyethyleneglycol. De meme, les hepatocytes isoles a partir de differentes especes y compris l'homme, immobilises ou non, peuvent etre congeles et conserves dans l'azote liquide. Dans les deux situations, le pourcentage de cellules viables apres decongelation et leurs activites fonctionnelles etaient comparables