Etude de la regulation transcriptionnelle de la laminine et de son influence sur le fonctionnement des hepatocytes de rat in vitro

Transcriptional activation of laminin and its influence on rat hepatocytes in vitro

• Auteur / Autrice : FRANCOISE LEVAVASSEUR
• Direction : Bruno Clement
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Rennes 1

Résumé

Nous avons etudie l'influence des composants majeurs des lames basales sur le fonctionnement des hepatocytes et les mecanismes impliques dans la derepression du gene lamine b2 lors de leur mise en culture. Les hepatocytes adherent sur le collagene quatre, le nidogene, et la laminine et ses fragments p1 et e8. L'attachement sur le complexe laminine/nidogene et le nidogene est inhibe par les anticorps anti-betal. Seul le collagene quatre et le complexe laminine/nidogene favorisent l'etalement des hepatocytes. Une diminution de la quantite d'arnm albumine apres 24 h de culture et l'apparition des arnm laminine b2 des 4h sont observees quelque soit le substrat. Ceci suggere que les composants des lames balases jouent un role transitoire sur le maintien des fonctions differencies des hepatocytes in vitro. Ceci a ete confirme dans les cocultures hepatocytes/cellules de ito dans lesquelles un depot de novo des composants des lames basales n'empeche pas les changements phenotypiques des hepatocytes apres 8 jours. Des traitements avec l'actinomycine et la cycloheximide ont montre que la detection des arnm laminine b2 en culture depend de regulations transcriptionnelles. La transfection transitoire de regions deletees du promoteur laminine b2 dans les cellules d'hepatome faza 567 a permis d'identifier trois regions regulatrices dont une inhibitrice possedant 3 motifs ctc et 2 boites gc. Des etudes d'empreinte a la dnase i, de southwestern et de gel retardement montrent que deux sequences contenant une boite ctc et une boite gc reconnaissent des facteurs nucleaires specifiques qui sont differents selon le niveau d'expression du gene. L'affinite des proteines pour le motif ctc depend des sequences adjacentes. Le motif ctc reconnait le facteur de replication alp145 (rf-c) et une proteine nucleaire inconnue de 60 kd qui a ete purifiee par chromatographie d'affinite. Une etude par immunocytochimie a montre que alp145 est localise dans le cytoplasme des hepatocytes fraichement isoles, puis preferentiellement dans le nucleole apres 4 h de culture. Ces resultats indiquent que l'activation du gene laminine b2 dans les hepatocytes est sous la dependance de plusieurs facteurs transcriptionnels, dont le facteur de replication rf-c et un nouveau facteur nucleaire reconnaissant les sequences riches en ctc