Chimie de coordination et topologie du site actif de la prostaglandine h synthetase : reactions avec les hydrazines monosubstituees et avec les phenylhydrazones et caracterisation par spectroscopie de resonance raman

Coordination chemistry and active site topology of prostaglandin h synthase: reactions with monosubstituted hydrazines and phenylhydrazones and resonance raman characterization

• Auteur / Autrice : SARRA GASPARD
• Direction : Daniel Mansuy
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

La prostaglandine h synthetase (pghs) est une hemoproteine qui intervient dans la biosynthese de mediateurs de l'inflammation, les prostaglandines. Les hydrazines monosubstituees rhnnh#2 sont oxydees par la pghs en diazene rn=nh avec formation de la pghsfe(ii) et du complexe pghsfe#i#i-diazene. L'oxydation de ce complexe conduit a un nouveau complexe a liaison fe-c de l'enzyme: pghsfe#i#i#i-r. La formation de ces complexes montre que la pghs possede un site actif ouvert. Les phenylhydrazones constituent une nouvelle classe de substrats suicide de la fonction dioxygenase de la pghs. Les -azohydroperoxydes correspondants sont formes, puis transformes en -azoalcools par la fonction peroxydase de la pghs. L'oxydation de ces -azoalcools par la pghsfe(iii) en cetone ou aldehyde avec la formation de n#2, de radicaux ph#. Et de la pghsfe(ii), conduit a un complexe pghsfei#i#i-ph. Les inhibitions de la pghs par les hydrazines monosubstituees et par les phenylhydrazones precedemment decrites sont vraisemblablement dues a la formation des radicaux r#. Et des complexes pghsfe#i#i#i-r. Le spectre de resonance raman de la pghs contenant de l'heme natif est caracteristique d'une espece dont le fer est hexacoordine et spin fort. Une structure pghsfe#i#i#i-aquo est proposee pour l'enzyme native. Le spectre de resonance raman de l'enzyme reconstituee montre la presence d'une nouvelle espece dont le fer est hexacoordine et spin faible et dont la structure pourrait etre: pghsfe#i#i-histidine distale. La proximite de l'histidine distale est demontree par la formation d'une liaison hydrogene entre l'histidine distale et le groupement carbonyle en milieu acide. Le spectre de resonance raman du complexe pghsfe#i#ico possede une bande a 530 cm##1 a ph 8; a ph acide, des bandes supplementaires sont detectees a 547 cm##1 et 586 cm##1 qui sont attribuables a fe-co et fe-co d'un nouveau conformere pghsfe#i#i-co. . . (#+hhis) par comparaison avec les resultats decrits pour les complexes hrpfe#i#i-co et ccpfe#i#i-co