Mise au point d'un nouveau test d'activite d'appariement d'adn homologues. Caracterisation de deux nouvelles activites dans les cellules de mammiferes

A new assay to analyze dna homologous pairing activities. Characterization of novel mammalian activities

• Auteur / Autrice : Pascale Bertrand
• Direction : B. LOPEZ
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

La connaissance des mecanismes de la recombinaison homologue presente un interet fondamental pour l'etude de la balance stabilite/instabilite du genome. La recherche d'homologie et l'appariement de brin d'adn sont des etapes precoces de la recombinaison homologue. Au cours de ce travail, un nouveau test d'activite a ete mis au point pour identifier des proteines impliquees dans l'appariement homologue, le pom blot (pairing on membrane). Ce test a tout d'abord ete caracterise avec la proteine reca, essentielle pour la recombinaison chez escherichia coli. De plus, ce test est specifique de l'activite reca dans un extrait brut de bacterie. Un des interets de ce test est son adaptation a des gels d'activite permettant l'etude de polypeptides isoles apres separation de proteines par electrophorese. Dans la levure saccharomyces cerevisiae, deux activites d'appariement sont detectees dont l'une est fortement diminuee dans des mutants de recombinaison rad51 ou rad52. Ceci indique qu'au moins cette derniere activite pourrait etre connectee aux processus de recombinaison. Dans les cellules de mammiferes, deux proteines (pom100 et pom75) ont ete identifiees et caracterisees. La possibilite d'analyser ces activites dans des extraits non purifies nous a permis d'une part de purifier pom75 et d'autre part de les etudier dans differentes conditions cellulaires. Les resultats indiquent que ces activites sont correlees a un etat proliferant de la cellule. Les activites pom sont aussi globalement augmentees dans des cellules provenant de patients atteints de differents syndromes associes a des defauts de reparation de l'adn et particulierement dans le cas de l'ataxie telangiectasie. A la vue de ces resultats et de nombreuses donnees de la litterature, nous proposons que la persistance de dommages due, soit a un defaut de reparation, soit a des defauts de controle du cycle cellulaire, stimulerait la recombinaison homologue et les activites d'appariement d'adn