Inhibition du cytochrome p-450 11 beta par la 18-vinyl et 18-ethynyl-progesterone

Inhibition of cytochrome p-450 11 beta by 18-vinyl and 18-ethynyl-progesterone

• Auteur / Autrice : Cécile Delorme
• Direction : A. MARQUET
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Les etapes terminales de la biosynthese de l'aldosterone, une hydroxylation en 11b suivie de deux hydroxylations en 18, sont catalysees chez le buf par une meme enzyme, le cytochrome p-450#1#1#b (desoxycortiscosteronecorticosterone18-hydroxycorticosteronealdosterone). L'objectif du travail est l'etude du mecanisme d'inhibition de l'enzyme par la 18-vinylprogesterone (18-vp) et la 18-ethynylprogesterone (18-ep), deux inhibiteurs k#c#a#t potentiels, deja synthetises au laboratoire. Nous avons montre, sur un systeme enzymatique bovin reconstitue, que la transformation des deux substrats, desoxycorticosterone (doc) et corticosterone, se fait au meme site et que la 18-hydroxycorticosterone est formee directement a partir de la doc, sans liberation de l'intermediaire corticosterone. L'inhibition par la 18-vp et la 18-ep a ete caracterisee dans des temps courts, sur chaque activite de l'enzyme (11b ou 18-hydroxylase). La valeur de k#i reversible pour l'hydroxylation en 18 est plus faible que celle pour l'hydroxylation en 11b. De plus, la 18-vp est un inhibiteur plus efficace que la 18-ep. La liaison des differents substrats et inhibiteurs a l'enzyme a ete examinee par spectroscopie visible. A partir de la synthese des resultats cinetiques et spectrophotometriques, un modele de fonctionnement de cette enzyme, impliquant un changement de conformation entre les etapes d'hydroxylation en 11 et 18, est propose. Par ailleurs, l'inactivation du p-450#1#1#b par ces composes est dependante du temps, saturable, nadph-dependante et tres reduite en presence du substrat. La nature de la fixation covalente a l'enzyme est actuellement au cours d'etude avec la 18-vp tritiee et impliquerait une n-alkylation de la porphyrine. Nous avons verifie la speficite enzymatique de la 18-vp, dans les cellules de cortex surrenalien de buf. La cible enzymatique est bien le p-45011b et plus particulierement l'activite d'hydroxylation en 18