Formation et stabilité intracellulaire de triple-hélices intermoléculaires

Formation and intracellular stability of intermolecular triple-helices

• Auteur / Autrice : Anne-Laure Guieysse-Peugeot
• Direction : Claude Hélène
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Paris, Muséum national d'histoire naturelle

Résumé

La formation d'une triple-hélice de 15 triplets de bases sur une séquence présente dans le promoteur du gène codant pour la chaine alpha du récepteur a l'interleukine-2 a été optimisée dans le but d'interférer avec la transcription de ce gène. La formation de la triple-hélice par un oligonucléotide lie de façon covalente a un agent photochimique (psoralène) a été mise en évidence sur une cible plasmidique dans des noyaux et des cellules en culture. La spécificité de fixation de l'oligonucléotide a été démontrée par l'utilisation d'un mutant dans le promoteur incapable de former la triple-hélice. Sur le gène endogène nous avons montré que la triple-hélice se forme dans l’ADN génomique de cellules T humaines in vitro et dans les noyaux isolés. Par ailleurs, la triple-hélice covalente formée par l'oligonucléotide couplé au psoralène après irradiation est stable dans les extraits nucléaires de cellules humaines et dans deux lignées lymphocytaires humaines. Une protéine d'un poids moléculaire apparent de 55KDa reconnaissant spécifiquement la structure en triple-hélice formée par un oligomère de 55 nucléotides formant une triple-hélice intramoléculaire et comportant la séquence de 15 purines du promoteur du gène IL-2ralpha a été identifiée dans des extraits nucléaires de cellules humaines (HeLa). Cette protéine pourrait stabiliser ces structures in vivo et jouer un rôle dans la régulation de l'expression génétique. Enfin, certains effets inattendus des oligonucléotides sur les ADN polymérases ont été mis en évidences : lorsqu'un oligonucléotide s'apparie partiellement au brin néo-synthetisé, il se substitue à la matrice, ce qui entraine un déraillement de la polymérase et un arrêt prématuré de l'élongation. Ce phénomène pourrait être mis à profit pour piéger les polymérases et éventuellement pour introduire de manière ciblée des modifications dans une séquence d’ADN