Caractérisation et purification des cytotoxines d'Actinobacillus pleuropneumoniae

Characterisation and purification of the actinobacillus pleuropneumoniae cytotoxins

• Auteur / Autrice : Eric Rolland
• Direction : Alain-Jean Cozzone
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences. Biochimie
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Lyon 1
• Jury : Président / Présidente : Alain-Jean Cozzone

Mots clés

Mots clés contrôlés

Lipopolysaccharides

Bactéries Gram négatives

Cytotoxines

Maladies respiratoires

Porc

Mycoplasma

Résumé

L'agent etiologique de la pleuropneumonie du porc est une bacterie a gram negatif appelee actinobacillus pleuropneumoniae. Des cytotoxines produites par actinobacillus pleuropneumoniae interviennent, par leur cytotoxicite vis-a-vis des macrophages alveolaires, dans le developpement de la maladie. Actinobacillus pleuropneumoniae produit trois cytotoxines, apxi, apxii et apxiii, appartenant a la famille des toxines rtx. Ces toxines, largement repandues chez les bacteries a gram negatif, ont pour cibles les cellules des tissus et du systeme immunitaire des mammiferes. Nous nous sommes attaches a purifier les trois toxines d'actinobacillus pleuropneumoniae, a caracteriser leurs activites toxiques et a developper des methodes d'analyse specifiques. Les trois toxines possedent des activites toxiques vis-a-vis de plusieurs especes cellulaires du sang et des tissus. Elles presentent toutefois des specificites d'action differentes. Alors qu'aucune specificite n'est identifiee dans leurs activites vis-a-vis des leucocytes, la mesure de leurs activites hemolytiques permet de distinguer differents comportements: apxi est fortement hemolytique, apxii est faiblement hemolytique et apxiii n'a pas d'activite hemolytique. Le lipopolysaccharide d'actinobacillus pleuropneumoniae, autre sous-unite de la bacterie intervenant dans la pathogenicite, possede aussi une activite cytotoxique vis-a-vis des leucocytes et peut ainsi interferer avec l'identification des toxines. Les toxines apxi, apxii et apxiii presentent des caracteristiques biochimiques tres voisines. Leurs masses moleculaires respectives sont de 105, 103 et 120 kilodaltons, leurs points isoelectriques de 6,1, 5,9 et 6,4. Des anticorps specifiques des trois toxines, caracterises par detection immunoenzymatique sur membrane, et selectionnes en fonction de leur reconnaissance epitopique, de leur pouvoir seroneutralisant et de leur affinite, ont ete utilises pour developper des techniques quantitatives completant les techniques de caracterisation des activites cytotoxiques et d'analyse biochimique. Les purifications, realisees par chromatographie d'immunoaffinite a l'aide d'anticorps monoclonaux, ont permis de purifier les toxines apxi, apxii et apxiii. Chaque toxine purifiee est indemne des autres toxines et indemne de lipopolysaccharide