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des thèses françaises
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Synthèse et purification d'un analogue du neuropeptide VIP (vasoactive intestinal peptide) par les technologies de l'ADN recombinant et du génie protéique
| Auteur / Autrice : | Joël Raingeaud |
| Direction : | Raymond Julien |
| Type : | Thèse de doctorat |
| Discipline(s) : | Biomembranes |
| Date : | Soutenance en 1994 |
| Etablissement(s) : | Limoges |
| Partenaire(s) de recherche : | autre partenaire : Université de Limoges. Faculté des sciences et techniques |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Résumé
Le vip (vasoactive intestinal peptide) est un peptide basique de 28 acides amines avec une extremite cooh aminee. Il appartient a la meme famille que la secretine et la glucagon et intervient principalement dans la vasodilatation, la relaxation des muscles lisses et la stimulation des secretions exocrines. Une strategie a ete envisagee permettant la production d'un analogue du vip par genie genetique. Afin de surmonter le probleme de l'instabilite de ce type de peptide exprime dans les systemes bacteriens recombinant notamment e. Coli, plusieurs unites du gene vip sont fusionnees pour former un concatemere. Les unites sont separees par des oligonucleotides de liaison codant pour une sequence en acides amines possedant des sites de clivage enzymatique (facteur xa) et chimique (hydroxylamine). Avec cette organisation, un gene multimetre de 16 vip a ete synthetise par addition sequentielle des genes, puis fusionne a un gene marqueur, celui de la glutathion s-transferase. La proteine hautement exprimee grace au plasmide pg 16v introduit dans la souche d'e. Coli jm 105, a ete purifiee et soumise a une double digestion. Seule l'utilisation du facteur xa a conduit a des formes physiquement caracterisees analogues du vip. Outre des formes polymeres, on obtient un peptide analogue du vip monomerique possedant du cote c-terminal une extre sequence de 5 ou 10 acides amines. Des experiences preliminaires sur l'activite biologique ont confirme 1) que ce peptide reconnait le recepteur du vip. 2) sa capacite a stimuler l'activite de l'adenylate cyclase et enfin 3) qu'il possede une activite relaxante sur un organe isole comparable a celle du cip naturel. Cette strategie de synthese et de purification, laisse envisager la production de derives agonistes et antagonistes du vip. Enfin, elle peut etre extrapolee ala production d'autres peptides a activite biologique d'une taille voisine