Insertion et expression de l'oncogène c-Ha-rasEJ, et modification par isoprénylation des P21 RAS dans les cellules corticosurrénales stéroidogéniques transformées

Insertion and expression of the c-Ha-rasEJ oncogene, and P21 RAS modification by isoprenylation in steroidogenic, transformed adrenocortical cells

• Auteur / Autrice : Bruno Petracca
• Direction : Bernard F. Maume
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie, biologie cellulaire et moléculaire
• Date : Soutenance en 1994
• Etablissement(s) : Dijon

Mots clés

Mots clés contrôlés

Transformation cellulaire néoplasique

Gènes ras

Stéroïdogenèse

Résumé

Ce travail a permis de rendre prolifératives des cellules différenciées, les cellules corticosurrénales de rat nouveau-né (NRAC) tout en maintenant leurs fonctions stéroidogéniques. Cette étude a porté plus précisement sur: 1) la caractérisation des cellules NRAC transformées par l'oncogène c-Ha-rasEJ (ou cellules RTAC, nommées GMn) par leurs paramètres de croissance: les cellules RTAC ont un temps de doublement de la population cellulaire de 36 heures, 35 pour cent des cellules se répartissent dans les phases S et G2+M du cycle cellulaire et elles ont la possibilité de croître en milieu sans sérum (SPFMc) ; 2) l'insertion de l'oncogène c-Ha-rasEJ dans le génome des cellules RTAC, montrée par amplification spécifique et détection par une sonde oligonucléotidique ; 3) l'expression de l'oncogène et des proto-oncogènes RAS : le produit de l'oncogène, la P21 RAS(val-12), a été mis en évidence dans l'ensemble des cellules RTAC avec une production plus faible que celle des P21 RASnon mutées ; 4) le rôle de l'isoprénylation de la P21 RASsur la localisation subcellulaire et la prolifération cellulaire: l'analyse par CLHPdes résidus isoprénylés décrochés des P21 RAS a montré que ces protéines pouvaient etre farnésylées, géranylées ou géranylgéranylées ; l'isoprénylation a fortement diminué lorsque les cellules ont été incubées avec la lovastatine ; la lovastatine inhibe la croissance des cellules RTAC en fonction de sa concentration ; la mévalonolactone permet d'annuler l'inhibition de la croissance ; la lovastatine empêche la localisation de la P21 RAS sur la membrane plasmique ; 5) la mesure du contenu cellulaire en cholestérol et de la stéroidogénèse: le SPFMc a permis de cultiver les cellules RTAC et Y1 avec un apport contrôlé de cholestérol ; la lovastatine diminue la quantité de cholestérol estérifié, celle de cholestérol total restant compatible avec l'homéostasie cellulaire ; les cellules RTAC ont conservé une activité de biosynthèse des stéroïdes dérivant de la progestérone ; les cellules GM8T transfectées par le plasmide P450(ALDO) l'ont exprimé transitoirement, transformant la corticostérone en aldostérone et en 18-hydroxycorticosterone ; les cellules GM9 issues de cellules transfectées par le P450(ALDO) synthétisent à partir de la progestérone deux composés renfermant un groupement aldéhydique en position 18. Les cellules RTAC constituent un modèle approprié à l'étude du mode d'action de la P21 RAS et à l'étude de la stéroidogenèse