Etudes des sites de liaison de l'acetylcholinestérase par les techniques de marquage d'affinité et de photoaffinité

Structural analysis of acetylcholinesterase ammonium binding sites by affinity and photoaffinity labelling

• Auteur / Autrice : Isabelle Schalk
• Direction : Maurice Goeldner
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

Durant cette thèse, l'étude structurale des régions ammonium des sites actif et périphérique de l'acetylcholinesterase a été abordée par les techniques de marquage d'affinité et de photoaffinité. Nous avons développé un marquage d'affinité sélectif du site périphérique avec le 6-diazonium coumarine. Nous avons également étudié les sélectivités de marquage de deux marqueurs de photoaffinité a) le p-N, N-dibutylaminobenzene diazonium (bisbutyle) est un marqueur des sites actif et périphérique; b) le p-N, N-dimethylaminobenzene (ddf) est un marqueur exclusif du site actif à faible concentration et des deux régions ammonium à forte concentration. La synthèse de ddf et de bisbutyle sous forme radioactive nous a permis d'identifier les acides aminés alkyles au niveau du site actif (phe330 et leu332) et au niveau du site périphérique (TRP279). L'identification de ces résidus alkyles a permis d'une part de localiser le site périphérique par rapport au site actif sur la structure tridimensionnelle de l'acetylcholinesterase de torpille et d'une part, de montrer que les acides aminés complexant les ammonium quaternaires sur l'acetylcholinestérase sont de nature aromatique. Par ailleurs, les calculs de stchiométrie de marquage indiquent que le marquage de ces deux régions de l'enzyme est mutuellement exclusif. Ceci suppose l'existence d'une interaction dynamique entre ces deux sites.