Reconnaissance de l'arn de transfert methionine par la methionyl-arnt synthetase de levure : une analyse fonctionnelle des determinants d'identite de la proteine et de l'acide nucleique

• Auteur / Autrice : Laurence Despons
• Direction : Franco Fasiolo
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Psychologie
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

La methionyl-arnt synthetase (metrs) de levure est un monomere de 85000 daltons possedant une forte homologie de sequence primaire avec la metrs native d'e. Coli. Le cur catalytique de l'enzyme de levure comprend les residus 192-594 et possede les memes caracteristiques qu'un fragment trypsique actif de la metrs d'e. Coli dont la structure 3-d a pu etre resolue: l'extremite c-terminale etablit avec le domaine n-terminal un lien essentiel au maintien d'une conformation active et stable de l'enzyme, comme l'ont montre des etudes de deletions progressives de l'extremite c-terminale des deux molecules. La metrs de levure est une metalloenzyme a zinc. Le zinc joue un role structural important. Les resultats d'une analyse par mutagenese dirigee montrent que les cysteines 350, 353 et 367 et l'acide aspartique 370 du motif doigt de zinc c-x#2-c-x#1#3-c-x#2d, present dans le domaine d-terminal, sont essentiels a l'activite et la stabilite de l'enzyme. Nous n'avons cependant pas pu mettre en evidence une perte de fixation du zinc, quand les cysteines 350 et 353 sont simultanement remplacees par des alanines. Les elements d'identite de l'arnt#m#e#t ont ete definis grace a la possibilite de creer des arnt synthetiques par une methode de transcription in vitro. Il ressort de ce travail que l'anticodon cau est incapable a lui seul de conferer une identite methionine a un arnt: il faut soit une boucle anticodon cucauaa, soit une combinaison de l'anticodon cau et de la base discriminatrice a73. Nous avons verifie, par mutagenese dirigee, un modele structural du complexe enzyme-arnt. Cette analyse fait apparaitre deux regions de la metrs impliquees dans la reconnaissance specifique de l'anticodon cau. Le peptide 650-663 et notamment la leucine 658 interviendrait surtout lors de la formation du complexe initial. Des residus, dans la region conservee 582-588, apparaissent comme les elements proteiques les plus critiques pour la selection positive de l'arnt#m#e#t et interviendraient au niveau de l'etat de transition