Isolement et caracterisation d'un adn complementaire de la poly(adp-ribose) polymerase chez l'amphibien xenopus laevis

Cloning and characterization of a complementary dna encoding poly(adp-ribose) polymerase in the amphibian xenopus laevis

• Auteur / Autrice : Bénédicte Saulier-Le Dréan
• Direction : Michel Philippe
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Rennes 1

Résumé

Chez l'amphibien xenopus laevis, l'activite de la poly(adp-ribose) polymerase (parp) a ete mise en evidence dans les ovocytes, les ufs et les embryons precoces. Elle est presente sous forme d'un polypeptide unique de 100 kda. Elle est activable par l'adn et presente une bonne immunoreactivite croisee avec des anticorps diriges contre les parp humaine et bovine. Un dosage de l'activite parp dans les ovocytes a montre que cette enzyme etait synthetisee au cours de l'ovogenese. D'autre part, un alignement des sequences proteiques des parp deja connues (humaine, murine, bovine et aviaire) a revele certaines zones de la proteine conservees a 100% entre ces 4 especes. Des oligonucleotides degeneres, derives a partir de ces zones conservees nous ont permis d'amplifier par pcr un fragment d'adnc de 750 pb codant pour la parp de xenope. Grace a cette sonde homologue, nous avons crible une banque d'adnc d'ufe de xenope, et isoles plusieurs clones. L'adnc reconstitue a partir de ces clones representait un total de 3,6 kb, soit environ 650 pb de region 3 non traduite et une phase de lecture ouverte, incomplete en 5, codant pour 998 acides amines de la parp de xenope. Cette proteine presente 71 et 78% d'identite avec les parp de mammiferes et de poulet. La sequence des 13 premiers acides amines de la proteine n'a pas pu etre isolee jusqu'a present. La parp de xenope a ensuite ete exprimee dans e. Coli, et caracterisee par western blot