Aminopeptidase de caeca pyloriques de thon (thunnus albacares) : purification, caracterisation et immobilisation sur supports solides

• Auteur / Autrice : MUSTAPHA HAJJOU
• Direction : YVES LE GAL
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Rennes 1

Résumé

Une aminopeptidase (ap) a ete purifiee a partir de caeca pyloriques de thon (thunnus albacares). L'enzyme est constituee de deux sous-unites dont le poids moleculaire a ete estime entre 74 kda et 82 kda. Son activite optimum est enregistree a ph 8. 8 et a 65#oc. L'ap qui est une glycoproteine riche en residus d'acides amines acides est insensible aux ions metalliques activateurs de certaines aminopeptidases. Elle est fortement inhibee par les chelateurs de metaux, l'amastatine, les ions hg2+, cu2+ et cd2+. C'est une metalloproteine a zinc vis-a-vis de laquelle l'amastatine se comporte comme un inhibiteur competitif a fixation lente et forte. Les parametres cinetiques de l'enzyme ont ete determines avec des substrats synthetiques. La forme apo-enzyme de l'ap est efficacement reactivee par des ions zn2+, co2+, cu2+ et al3+. L'enzyme partiellement deglycosylee est moins stable que l'enzyme native. Les caracteristiques de l'ap presentent des differences avec celles des aminopeptidases caracterisees dans la litterature. L'ap partiellement purifiee a ete immobilisee sur deux types de supports solides: deae cellulose et sephadex g-200. L'aminopeptidase immobilisee sur sephadex g-200 a ete utilisee pour hydrolyser la caseine et la bsa natives ou prealablement traitees par la trypsine bovine