Défense du colza contre les insectes phytophages déprédateurs : étude d'une stratégie basée sur l'expression d'inhibiteurs de protéases dans la plante / Michel Bonade Bottino, sous le direction de Lise Jouanin

Defense of rapeseed against phytophagous pest insects: study of a strategy based upon in planta expression of proteinase inhibitors

• Auteur / Autrice : Michel Bonade Bottino
• Direction : Lise Jouanin
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

Le colza est la cible de nombreux insectes phytophages, principalement des coleopteres, dont les larves causent des degats tres importants sur la culture. La mise en uvre de la lutte chimique contre ces insectes est tres contraignante. Une nouvelle strategie de defense de la plante, par expression in planta d'inhibiteurs de proteases, est proposee dans ce travail. Les proteases digestives des coleopteres phytophage appartiennent aux familles des proteases a serine et a cysteine. Nous avons utilise la sequence codante d'un inhibiteur de proteases a serine du soja (cii) et celle d'un inhibiteur de proteases a cysteine du riz (oci). Une methode de transfert de gene via agrobacterium tumefaciens a ete mise au point sur le cultivar de colza de printemps 00 drakkar. Des plantes exprimant constitutivement les proteines cii et oci ont ete obtenues et caracterisees par les techniques northern (cii), southern, western et par test d'inhibition de protease in vitro (oci). Un travail a egalement ete initie dans le but de disposer de promoteurs inductibles a la blessure pour coordonner l'expression des inhibiteurs de proteases dans la plante a l'agression par les insectes. Ce travail a ete mene sur les promoteurs pr1a de tabac et le promoteur bi-directionnel mas1,2 d'a. Rhizogenes avec la sequence codante de la -glucuronidase. Les resultats preliminaires (tests d'activite -glucuronidase histologiques et fluorimetriques) montrent que le promoteur mas1,2 est effectivement inductible a la blessure dans le colza. La comparaison du profil en proteases digestives de la phedonne et des deux ravageurs (baris et charancon de la tige) montre que la phedonne, pour laquelle on dispose d'une technique d'elevage, peut etre utilisee comme insecte modele pour le test des plantes. Bien que les proteases digestives de ces trois insectes se soient montrees sensibles a oci in vitro, les tests preliminaires sur plantes exprimant fortement cet inhibiteur de proteases n'ont pas permis d'observer de forte mortalite sur phedonne. Plusieurs hypotheses explicatives sont proposees