Etude du mecanisme d'excision de mini tn10

Study of mini tn10 excision mechanism

• Auteur / Autrice : EMMANUELLE D'ALENCON
• Direction : DUSKO EHRLICH
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

De nombreux rearrangements genetiques se produisent par recombinaison entre de courtes sequences repetees. Parmi ces remaniements, les deletions conduisent a une perte d'information genetique et au rapprochement de sequences habituellement eloignees. Ceci peut avoir comme consequence l'inactivation ou l'activation de certaines fonctions. L'excision du transposon mini tn10 est un evenement de deletion se produisant entre les repetitions directes qui sont creees lors de l'insertion de cet element dans la sequence cible. Cet evenement independant de la transposase a ete utilise comme outil pour etudier les facteurs affectant la frequence des deletions et le mecanisme conduisant a leur formation. Les excisions precise et imprecise de mini tn10 (impliquant respectivement des sequences repetees directes de 9 paires de bases ou imparfaites de 24 paires de bases) sont toutes les deux stimulees lorsque le transposon est porte par un derive de pbr322 contenant l'origine de m13 lors de l'infection des bacteries par m13 ou le phage apparente f1. Le phenomene est rapide et efficace. La stimulation de l'excision requiert l'activation de la replication cercle-roulant initiee a l'origine de m13 par les proteines de replication phagiques ii (proteine responsable de l'initiation et de la m13 par les proteines de replication phagiques ii (proteine responsable de l'initiation et de la terminaison) et v (proteine se liant a l'adn simple brin). Elle requiert egalement l'helicase rep codee par escherichia coli necessaire a l'elongation de la replication du phage m13. L'activation d'une autre origine de replication cercle-roulant, celle de pc194, un plasmide de bacteries a gram positif replicatif chez escherichia coli, ne stimule pas l'excision d'une structure palindromique encadree par des repetitions directes de 18 paires de bases. Les modeles de mecanisme moleculaire connus pour ce type de remaniements sont de type conservatifs (cassure et reunion) ou non conservatifs (choix de copie). Afin de trancher entre ces deux types de modeles, nous avons mesure le transfert d'atomes lourds des molecules parentales aux molecules recombinantes. Nous avons pu montrer que les molecules recombinantes formees lorsque la replication cercle-roulant est induite n'heritent pas de materiel nucleotidique parental, et resultent donc d'un mecanisme de recombinaison de type choix de copie