Thèse soutenue

Etude de la proteine vp2 du rotavirus : assemblage de particules recombinantes et interactions avec les acides nucleiques
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Auteur / Autrice : MARIE LABBE
Direction : Jean Cohen
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
Date : Soutenance en 1993
Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

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Les rotavirus appartiennent a la famille des reoviridae et sont les agents etiologiques majeurs des gastroenterites. Les particules virales sont constituees d'une triple couche proteique. Les capsides externe et interne sont formees respectivement par les proteines vp7 et vp4 et par la proteine vp6. La proteine vp2 et les proteines mineures vp1 et vp3 forment le core qui entoure le genome bicatenaire segmente. La proteine majeure des cores (vp2) a ete exprimee dans le systeme baculovirus/cellules de lepidopteres. La proteine vp2 recombinante est capable de s'assembler dans le cytoplasme des cellules d'insectes pour former des particules similaires en taille et en morphologie aux cores de rotavirus. Ces pseudocores sont depourvus d'acides nucleiques. Ces resultats confirment les donnees de cryomicroscopie electronique sur l'existence d'une troisieme capside constituee de la proteine vp2. Ils montrent egalement que le core peut s'assembler en l'absence des autres proteines virales et du genome et nous apportent des informations importantes sur la morphogenese du rotavirus. L'assemblage de vp7 en absence de la proteine ns28 qui permet la translocation des particules virales a travers la membrane du reticulum endoplasmique ou s'effectue normalement l'assemblage de vp7, remet en question le role du recepteur interne. De meme, nous avons quelques elements sur l'assemblage des proteines mineurs du core. Les interactions de la proteine vp2 recombinante avec les acides nucleiques ont ete analysees par la technique de northwestern. Comme la proteine virale, la proteine recombinante fixe les acides nucleiques de facon non specifique. Elle possede cependant plus d'affinite pour l'arn simple brin. A l'aide de proteines vp2 tronquees exprimees dans le systeme baculovirus, le site de fixation des acides nucleiques a pu etre localise a l'extremite nh2 de vp2, entre les acides amines 1 et 132. Par des experiences de pontage aux ultraviolets realisees a partir de particules virales a simple capside purifiees, nous avons pu montrer que seule la proteine vp2 fixe l'arn genomique. Le domaine de fixation des arn genomiques a pu etre localise a l'extremite nh2 de la proteine vp2 et ce resultat concorderait donc avec celui defini avec les proteines recombinantes tronquees. L'expression des proteines dans le systeme baculovirus permet d'etudier l'assemblage des capsides virales et de mieux definir les interactions proteines/proteines et proteines/arn