Utilisation d'hybrides somatiques pour l'analyse de la differenciation, la localisation chromosomique de genes d'extinction et l'etude de la polarite cellulaire hepatique

Utilization somatic hybrids to analyse of differentiation, extinguisher genes assignement and the study of cellular hepatic polarity

• Auteur / Autrice : CHANTAL HAMON-BENAIS
• Direction : Doris Cassio
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

L'etude des mecanismes de regulation responsables de l'acquisition et du maintien de l'etat differencie est l'un des problemes les plus fascinants que pose la differenciation cellulaire. Nous avons aborde ce probleme par des methodes genetiques, notamment l'hybridation de cellules somatiques qui permet de confronter dans une meme cellule, des genomes parentaux varies. Lorsque l'on fusionne deux cellules d'origine histogenetique differente, on observe generalement l'extinction des fonctions parentales differenciees. L'un des genomes parentaux produirait un ou des facteurs d'extinction qui agirait en trans en bloquant l'expression du gene codant pour la proteine consideree. On connait tres peu de genes d'extinction (trois loci decrits); le mieux caracterise etant tse i qui bloque l'expression de plusieurs fonctions hepatiques, qui est porte par le chromosome 11 de souris et 17 humain et code pour une sous-unite de la proteine kinase a. Nous avons etudie: 1) des hybrides monochromosomiques porteur d'un chromosome extincteur remanie de souris (fusion x-autosome). Nous avons montre que ce chromosome eteint specifiquement le gene de l'albumine, qu'il est efficace a long terme quand on lui augmente le nombre de ses cibles, et que le locus d'extinction (tse a) implique est localise sur le chromosome 3 de souris; 2) des hybrides a nombre de chromosomes reduit. Nous avons mis en evidence l'extinction globale d'une quinzaine de genes hepatiques et montre que l'extincteur implique est sur le chromosome 2 humain et differe des autres loci d'extinction deja decrits. Ainsi, ces hybrides ne contiennent pas le chromosome 17 et sont pourtant eteints pour les fonctions cibles de tse 1. Grace a ce travail, il est maintenant evident qu'un meme gene est regule par differents loci d'extinction et ces loci sont de deux types, un type general responsable de l'extinction de tout un ensemble de genes hepatiques et un type secondaire specifique d'une fonction ou d'un groupe de fonctions. L'etude in vitro de la polarite et de la morphogenese de l'hepatocyte etait difficilement realisable parce que les hepatocytes en culture primaire maintiennent mal leur differenciation et leur polarite et qu'il n'existait aucune lignee hepatique polarisee. Nous avons montre que nos hybrides cellulaires sont des reservoirs potentiels de cellules polarisees, et caracterise wif12. 1, premiere lignee hepatique differenciee et polarisee in vitro, qui constitue un bon modele de morphogenese hepatocytaire