Cristallogenese des macromolecules : etude du processus de cristallisation de la ribonuclease a

Crystallogenesis of macromolecules: study of crystallisation process of ribonuclease a

• Auteur / Autrice : MARIE-PIERRE CROSIO-BOULARD
• Direction : Paul Vigny
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

La comparaison de six formes cristallines d'une proteine modele, la ribonuclease a, obtenues avec des agents cristallisants differents montre que les contacts cristallins different aussi bien par leur nombre que par leur surface enfouie. Cependant on retrouve un contact symetrique commun au sel et au polyethylene-glycol. Ce contact possede la plus grande surface enfouie et de nombreuses ressemblances avec des sites d'interactions entre proteines. Ceci suggere que ce dimere pourrait etre un precurseur de la cristallisation lorsque les sels ou les polymeres sont utilises. Nous avons alors entrepris une etude de ces etapes precoces par anisotropie de fluorescence. Les experiences d'anisotropie statique indiquent qu'il existe une concentration critique d'agent cristallisant pour laquelle les interactions entre molecules de proteines deviennent favorables. Ces experiences nous ont permis de trouver de nouvelles conditions de cristallisation de la ribonuclease faciles a mettre en uvre et tres reproductibles. A partir des experiences de declins d'anisotropie, on a cherche a caracteriser les especes presentes dans les solutions donnant lieu a cristallisation. Il apparait que deux processus de cristallisation doivent etre envisages suivant que l'agent de cristallisation est un sel ou un solvant organique