Étude des relations structure-fonction de l'exotoxine A de Pseudomonas aeruginosa à l'aide de peptides synthétiques

Study of the structure-function relationship of pseudomonasq aeruginosa exotoxin a using synthetic peptides

• Auteur / Autrice : Karine Rutault
• Direction : Micheline Guinand
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences. Biochimie
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Lyon 1
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Micheline Guinand

Mots clés

Mots clés contrôlés

ADP-ribosylation

Élongation (biologie moléculaire)

Toxicologie cellulaire

Toxines bactériennes

Bactéries Gram négatives

Pseudomonas aeruginosa

Résumé

L'exotoxine a est le compose le plus toxique secrete par p. Aeruginosa. C'est une proteine de 613 acides amines qui inhibe la synthese proteique par adp-ribosylation du facteur d'elongation ef-2 des cellules eucaryotes. Elle a ete purifiee a partir de la souche pa103. Un fragment correspondant a la sequence 392-613 a ete prepare par clivage de la toxine par la subtilisine. Il possede une activite adp-ribosyltransferase identique a celle de la toxine et une activite nad-glycohydrolase 4 fois plus importante mais il n'est pas cytotoxique. Les serums anti-toxine et anti-fragment inhibent la toxicite de la toxine. Un peptide (residus 392-404 de la toxine) a ete synthetise et couple a 3 proteines porteuses. Les anticorps anti-(thyroglobulinepeptide) inhibent 90% de l'activite adp-ribosyltransferase mais n'ont aucun effet sur l'activite nad-glycohydrolase. L'etude de la fixation de l'exotoxine sur ef-2 suggere que les anticorps anti(392-404) inhibent l'activite adp-ribosyltransferase en empechant, par encombrement steique, l'acces de ef-2 sur son site de fixation. Ces anticorps ne neutralisent pas la toxicite; il existe donc un ou plusieurs epitopes impliques dans la toxicite entre les residus 405-613. Le peptide (392-408) a ete fixe sur un support immunologiquement inerte poly-(lys-betaala). Les anticorps diriges contre cette structure synthetique reconnaissent l'exotoxine a et inhibent jusqu'a 40% de l'activite adp-ribosyltransferase. Trois autres peptides correspondant aux sequences 74-88, 318-336 et 381-399 ont ete synthetises, purifies et couples a la thyroglobuline. Les serums obtenus reconnaissent la toxine mais n'ont aucun effet sur l'activite adp-ribosyltransferase et sur la toxicite de la molecule