Interactions de la 10-N-Nonyl acridine orange avec le cardiolipide : Applications à l'analyse du chondriome

par Jean-Michel Petit

Thèse de doctorat en Biochimie et biologie cellulaire

Sous la direction de Raymond Julien.

Soutenue en 1993

à Limoges , en partenariat avec Université de Limoges. Faculté des sciences et techniques (autre partenaire) .


  • Résumé

    L'analyse in situ de la mitochondrie par cytometrie en flux a ete principalement realisee jusqu'ici grace a la rhodamine 123 dont l'incorporation dans la cellule s'avere dependante du potentiel mitochondrial restreignant l'etude du chondriome aux seules cellules vivantes. Des travaux plus recents, par spectroscopie de fluorescence et par cytometrie en flux, ont montre que la 10-n-nonyl acridine orange (nao) colore les mitochondries de cellules hela et de splenocytes murins independamment du potentiel mitochondrial. Dans ce travail, nous avons mis en evidence par le sous-fractionnement d'hepatocytes que la nao se fixe dans la membrane mitochondriale. L'etude comparee de la specificite de fixation de differents derives n-alkyles d'acridine etablit que seul, le derive nonyl se fixe preferentiellement dans l'organite. Cette fixation inhibe l'etat 3 de la respiration, la synthese de l'atp, et a un niveau moindre le transport du pi et des nucleotides. Toutes ces inhibitions peuvent etre expliquees par des interactions entre la nao et le cardiolipide, phospholipide fortement associe a l'activite des complexes enzymatiques du transport des electrons et de la synthese de atp. L'homologie entre les courbes de saturation des mitochondries et de liposomes contenant du cardiolipide, les constantes d'affinite obtenues soulignent la specificite de la nao pour le cardiolipide tout comme la stchiometrie de liaison (2 molecules de colorant par cardiolipide). Les interactions hydrophobes entre deux molecules adjacentes de chromophore deplacent la fluorescence du vert (525 nm) dans le rouge (640 nm). La mesure en fonction de la concentration en colorant de la fluorescence rouge permet d'etablir la distribution transverse du cardiolipide entre les deux feuillets de la membrane interne mitochondriale. Appliquee a differents types cellulaires, cette analyse fait apparaitre que l'activite du chondriome depend de l'organisation du cardiolipide

  • Titre traduit

    Interactions between 10-n-nonyl acridine orange and cardiolipin. Applications to chondriome analysis


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  • Détails : 101 p

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