Thèse soutenue

Purification de l'élastase MAP1 de Myxococcus Xanthus : étude physico-chimique et enzymatique, recherche de son gène et de sa fonction biologique

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Auteur / Autrice : Laurence Dumont
Direction : Bernard Verneuil
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biochimie
Date : Soutenance en 1993
Etablissement(s) : Limoges
Partenaire(s) de recherche : autre partenaire : Université de Limoges. Faculté des sciences et techniques

Résumé

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L'objectif initial de ce travail etait de purifier les proteases associees a une activite elastolytique mise en evidence dans les surnageants de culture de myxococcus xanthus. Un protocole de purification combinant les chromatographies d'echange d'ions et d'affinite nous a permis de purifier une elastase appelee map1 (myxobacterial alkaline protease 1) et d'obtenir une seconde elastase appelee map2, contaminee par une seule proteine n'ayant pas d'activite proteolytique. Map1 (mm: 39000; pi; 5) est une metalloprotease de ph d'activite optimum alcalin (8,2). La sequence n-terminale de l'elastase a ete etablie sur les 21 premiers acides amines. L'etude de sa specificite sur un substrat synthetique et sur la chaine b de l'insuline oxydee, revele l'aptitude particuliere de cette enzyme a reconnaitre les residus hydrophobes en position p1. L'utilisation de mutants du developpement nous a permis de demontrer que la production d'elastase etait affectee chez les mutants asga et asgb. Des essais de restauration du developpement chez un mutant asgb (dk4587) par map1 ont revele que l'elastase n'avait pas l'activite de facteur a de la trypsine. Nous avons cherche le gene codant pour map1. Deux fragments ont ete sequences, l'un de 63pb correspondant a la sequence n-terminale de l'elastase obtenue par microsequencage et l'autre de 516pb qui se caracterise par 94% de bases gc