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Thèse soutenue

Utilisation des anticorps anti-idiotypes comme images internes fonctionnelles de sites actifs enzymatiques : production et caractérisation d'un anticorps catalytique à activité cholinestérase

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Auteur / Autrice : Ladan Demichele
Direction : Alain Friboulet
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Génie Enzymatique, Bioconversion, Microbiologie
Date : Soutenance en 1993
Etablissement(s) : Compiègne
Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Sciences pour l'ingénieur (Compiègne)

Résumé

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L'exploitation des propriétés d'image interne des anticorps anti-idiotypes nous a permis d'obtenir des anticorps catalytiques (abzymes) par une approche réellement enzymologique. L'anticorps monoclonal 9A8 a été sélectionné contre l'anticorps monoclonal AE2, dirigé lui-même contre le site actif de l'acétylcholinestérase de l'érythrocyte humain. Selon la théorie du réseau idiotypique, l'anticorps monoclonal 9A8 représente l'image interne du site actif de l'acétylcholinestérase. L'hydrolyse de l'acétylthiocholine par l'anticorps monoclonal 9A8 présente un comportement cinétique de type michaëlien. La valeur de la constante catalytique (kcat égal 81 s 1) est plus faible que celle de l'enzyme naturelle alors que la valeur de la constante michaëlienne (Km égal 0,6 mM) est plus élevée. Cependant le taux d'accélération (kcat/kuncat égal 4,15 X 10) est plus élève que dans le cas des anticorps catalytiques obtenus par la voie des analogues d'état de transition. Par ailleurs, l'anticorps monoclonal 9A8 représente une spécificité relâchée vis à vis des substrats et inhibiteurs connus des estérases. Cette approche anti-idiotypique permet également d'étudier différentes copies structurales et fonctionnelles du site actif de la même enzyme afin de pouvoir étudier les relations structure fonction. De plus, la production d'anticorps anti-idiotypes à partir des enzymes modifiées chimiquement au niveau de leur site actif permet d'obtenir des copies protéiques des catalyseurs mais possédant une nouvelle activité enzymatique.