Etude cinetique de la thioacylation des proteines : application a la modification chimique d'enzymes de rouissage du lin

Kinetic study of proteins thioacylation: application to the chemical modification of enzymes used for flax retting

• Auteur / Autrice : PHILIPPE ARSENE
• Direction : Guy Lévesque
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Caen

Résumé

Les reactifs de thioacylation reagissent rapidement et de facon selective avec les lysines des proteines, permettant l'obtention de taux de modification eleves dans des conditions douces de temperature et de ph. Nous en avons synthetises, a chaines alkyles, a noyaux aromatiques ou omega fonctionnels, en particulier un dithioester porteur d'un acide phosphonique en position delta et un dithioester omega-ammonium quaternaire. Une etude cinetique de la reaction a ete realisee avec differents reactifs, sur la gelatine comme modele. Les taux de modifications sont determines par spectroscopie des groupes thioamides formes et/ou par dosage au tnbs des amines libres residuelles. Une cinetique d'ordre deux par rapport aux amines des lysines a ete observee avec les dithioesters et dithioacides aliphatiques. Les derives aromatiques sont moins stables en milieu aqueux que les derives aliphatiques et n'autorisent que des taux mediocres de modification. Les dithioacides sont moins reactifs que les dithioesters a ph basique, mais reagissent plus vite a ph neutre ou legerement acide, ce qui les rend interessants pour des enzymes fragiles en milieu basique. Un melange d'enzymes destine au rouissage du lin (issu d'aspergillus niger), a ete modifie par le tridecane dithioate de carboxymethyle en vue de moduler les activites catalytiques presentes. Une etude cinetique a permis de preparer des echantillons modifies a differents taux. Les mesures d'activites enzymatiques, sur substrats specifiques, ont montre la conservation de l'activite principale endopolylacturonase quels que soient le taux de modification, et la diminution des activites secondaires (cellulase, xylanase, pectine lyase et cellulase insoluble) avec l'augmentation du taux de modification. Ces resultats ont ete confirmes par des essais de rouissage et les analyses des fibres obtenues. Cette modification peut etre consideree comme une methode originale de purification de ce melange d'enzymes