Etude spectroscopique des intéractions de cytotoxines amphipathiques avec des membranes phospholipidiques modèles et de leur activité sur des érythrocytes

Spectroscopic study of amphipathic cytotoxins interacting with phospholipidic membranes and their activity on erythrocytes

• Auteur / Autrice : Isabelle Cornut
• Direction : Jean André Dufourcq
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Chimie - Physique
• Date : Soutenance en 1993
• Etablissement(s) : Bordeaux 1
• Partenaire(s) de recherche : Laboratoire : Centre de Recherche Paul Pascal (Pessac1963-....)

Résumé

Nombre de cytotoxines naturelles d'origines tres differentes se structurent en helice amphipathique. L'etude porte sur des analogues d'une toxine bacterienne, la -hemolysine de staphylococcus aureus. Les polypeptides de 16 a 26 residus, tronques dans la partie n-terminale et dont la sequence est rationalisee par rapport a celle de la toxine naturelle, ont ete synthetises et caracterises quand a leur activite hemolytique. Des etudes spectroscopiques par dichroisme circulaire, fluorescence statique et resolue dans le temps d'un unique residu trp#1#6 ont permis de demontrer le repliement en helice attendu et d'etablir des relations structure-activite. Ceci revele qu'une augmentation de la charge nette accroit aussi l'activite hemolytique alors qu'elle diminue l'auto-association des peptides en solution. Les parametres determinants pour l'activite hemolytique sont donc: le moment hydrophobe, la charge nette et la longueur peptidique qui permet la stabilite de l'helice et une fixation quasi irreversible aux lipides. Ces conclusions ont abouti au developpement et a l'etude de peptides idealement amphipathiques comme modeles physicochimiques de toxines naturelles. Ils possedent une forte activite hemolytique, cinq fois superieure a celle de la melittine, se structurent egalement sous forme d'helice et interagissent avec les vesicules lipidiques. Leur marquage par un groupe fluorescent en position 1 revele un masquage de ce residu a l'interface lipidique. Enfin, l'etude de leur affinite pour d'autres sites amphipathiques non lipidiques revele le large eventail des proprietes de ces nouveaux peptides