Inhibition et purification de l'obtusifoliol-quatorze-alpha-methyl-demethylase de mais (zea mays)

Inhibition and purification of the obtusifoliol fourteen-alpha demethylase from maize seedlings (zea mays)

• Auteur / Autrice : FLORENCE SALMON
• Direction : Pierre Marc Benveniste
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1992
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

La biosynthese des sterols fait intervenir chez les eucaryotes plusieurs etapes de demethylation dont une en position 14, qui se deroule en plusieurs phases oxydatives du groupement methyle et est due a l'intervention d'une monooxygenase a cytochrome p450 (p450-14dm). Le substrat de cette enzyme est l'obtusifoliol chez les plantes et le lanosterol chez les animaux et les champignons. De nombreux fongicides agricoles ou medicaux sont des derives heterocycles azotes qui inhibent l'activite de la lanosterol 14-dm mais qui peuvent avoir des effets herbicides en inhibant aussi l'obtusifoliol-14dm. En consequence, nous avons teste l'interaction de deux series de derives azotes, fournis par ciba-geigy, avec des microsomes de plantules de mais et de levure. Nous avons tente d'en degager des motifs structuraux permettant une affinite et une selectivite maximale pour l'enzyme de plantes. Un de ces derives, le cga 214372, s'est revele etre le meilleur inhibiteur de l'obtusifoliol-14dm et le plus selectif. Par ailleurs, nous avons entrepris la purification de l'obtusifoliol-14dm a partir des plantules de mais. Deux strategies ont ete adoptees: la premiere permet de purifier partiellement un complexe enzymatique actif, mais en faible quantite. La seconde permet d'isoler une partie des cytochromes p450 contenus dans les microsomes et de les purifier ensuite a homogeneite. Les fractions ne contiennent plus d'activite obtusifoliol-14dm mais ont pu etre identifiees grace a des anticorps diriges contre la lanosterol-14dm de levure