Purification, analyse bidimensionnelle, clonage et sequencage de l'acide trans-cinnamique 4-hydroxylase, cytochrome p450 intervenant dans le metabolisme general des phenylpropanoides chez les vegetaux superieurs

• Auteur / Autrice : GUSTAV HERMANN TEUTSCH
• Direction : Danièle Werck-Reichhart
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1992
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

L'acide trans-cinnamique 4-hydroxylase (ca4h) est une monooxygenase a cytochrome p450 qui joue un role cle dans le metabolisme vegetal. A partir de tubercules de topinambour, cette proteine a ete purifiee a homogeneite. L'extremite n-terminale a ete microsequencee. Des anticorps polyclonaux produits avec la proteine pure inhibent selectivement l'activite ca4h et reconnaissent sur western blot une seule proteine. 90000 clones d'une banque exprimant les cdna de topinambour ont ete isoles, l'un d'eux a ete sequence. Il presentait la plupart des domaines caracteristiques d'un p450, mais il n'etait pas complet. Il a ete utilise pour cribler 300000 clones d'une deuxieme banque de cdna de topinambour. Parmi les 176 clones positifs, un clone complet a pu etre isole. Sa sequence comporte tous les domaines conserves des p450. Son extremite 5 code pour la sequence n-terminale de la proteine enzymatique purifiee, telle qu'elle a ete determinee par microsequencage. Il s'agit du premier cdna isole codant pour un cytochrome p450 vegetal dont la fonction physiologique soit connue