Mesure de l'affinite d'anticorps monoclonaux anti-viraux

Measurement of affinity of viral monoclonal antibodies

• Auteur / Autrice : Agnès Azimzadeh
• Direction : Marc H. V. Van Regenmortel
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1992
• Etablissement(s) : Strasbourg 1

Résumé

L'affinite d'anticorps monoclonaux diriges contre le virus de la mosaique du tabac a ete determinee en utilisant differentes methodes. Une methode en phase-liquide a ete developpee et utilisee en tant que methode de reference pour la comparaison avec les autres techniques. Dans cette methode, l'anticorps et l'antigene sont incubes en solution, puis a l'equilibre, les anticorps lies et les particules virales sont sedimentes par ultracentrifugation. Les anticorps libres dans le surnageant sont ensuite doses a l'aide d'un test elisa sandwich. Cette methode a permis de determiner la constante d'affinite (k) pour la liaison monovalente et bivalente des anticorps ainsi que la valeur de la valence antigenique. Les resultats obtenus avec cette methode ainsi qu'avec une autre methode en phase-liquide utilisant un conjugue fab'-enzyme ont montre une influence de la concentration absolue de reactifs sur la valeur de k. La mesure de l'affinite des anticorps a l'aide de tests en phase-solide, dans lesquels l'antigene est immobilise, a ete proposee dans le passe comme une alternative plus rapide et plus sensible que les techniques en phase-liquide. Nous avons donc compare les resultats obtenus avec nos anticorps monoclonaux en phase-liquide avec ceux obtenus en phase-solide. Nos resultats vont dans le sens de l'idee generalement repandue que les valeurs de k observees en phase-solide sont surestimees, et que cette methode ne donne donc qu'une estimation de la valeur de k. En 1985, friguet et al ont developpe une methode elisa de titration a l'equilibre pour mesurer l'affinite d'anticorps diriges contre des proteines et des peptides. Nous avons adapte cette methode a la mesure de l'affinite d'anticorps anti-virus. Nos resultats ont montre que la methode elisa de titration a l'equilibre permet l'obtention de valeurs de k comparables a celles obtenues a l'aide de la phase-liquide classique avec l'avantage d'une rapidite et d'une sensibilite accrues