Radiomarquage des anticorps monoclonaux par le technetium (99mtc) utilisant une voie directe et indirecte par l'intermediaire d'un agent bifonctionnel, en vue de leur utilisation en immunoscintigraphie

99mtc direct labeling and indirect labeling via a bifunctional chelating agent of monoclonal antibodies for immunoscintigraphic studies

• Auteur / Autrice : JEAN-YVES GARRON
• Direction : Bernard Rossignol
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1992
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

Le radiomarquage par la voie directe qui utilise les fonctions naturelles presentes sur la proteine aboutit a un complexe instable in vivo. La stabilite peut etre augmentee considerablement en activant l'anticorps par une reduction des ponts disulfures realisee par une reaction de reduction menagee. Ces groupements sulfhydriles complexent fortement le technetium. Nous avons optimise cette reaction afin d'obtenir un rendement de marquage eleve (>99%). La structure et l'immunoreactivite de l'anticorps sont preservees. Nous avons developpe deux methodes pour stabiliser les groupes sulfhydriles generes. Par lyophylisation d'une part et par protection des groupes thiols a l'aide d'un agent protecteur. Un conditionnement sous forme de kit est propose pour des etudes d'immunoscintigraphie en medecine nucleaire. Seuls l'igg entiere et le fragment fab peuvent etre marques par cette voie directe, l'activation du fragment fab#2 generant irremediablement des fragments fab'. Le marquage du fragment fab#2 est realise par utilisation d'un agent bifonctionnel. La formation d'un immunoconjugue, consistant au couplage de l'agent bifonctionnel (ligand) sur l'anticorps aboutissant au compose anticorps-ligand, suivi du radiomarquage par le tc semble etre la meilleure approche pour une utilisation en routine. Afin de prevenir des sites non specifiques de liaison du tc sur l'anticorps, les ligands doivent presenter une haute reactivite et une grande affinite pour le radiometal. Nous avons compare la reactivite de deux classes de ligands. Les acides polyaminocarboxyliques tres reactifs pour le motif tco; les ligands soufres tels les diaminodithiols (n#2s#2) les bis dithiocarbamates, reagissant preferentiellement avec le motif tcn. Les ligands n#2s#2 semblent etre de tres bon agents chelatants