Controle genetique de la morphogenese neuronale chez les murides

Genetic control of neuronal morphogenesis in murines

• Auteur / Autrice : Alain Joliot
• Direction : Alain Prochiantz
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1992
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

Dans ce travail nous avons voulu etudier le role possible des proteines a homeodomaine dans la regulation de la differenciation des neurones post-mitotiques. A cette fin nous avons synthetise un peptide a homeodomaine de large specificite et susceptible de se fixer sur les sequences canoniques presentes dans les promoteurs des genes dont la transcription est regulee par des homeoproteines. Le protocole experimental initialement prevu etait donc d'introduire l'homeodomaine de antennapedia dans les neurones en culture afin d'inhiber de facon competitive l'action des homeoproteines endogenes. Nous avons, au cours des premieres experiences, constate que l'homeodomaine de 60 acides amines (pantp) penetrait dans les neurones et s'accumulait dans leur noyau, phenomene suivi d'une augmentation de la differenciation neuritique. Cette observation nous a conduit a analyser le mode de penetration du peptide et a determiner une sequence de 16 acides amines correspondant a une partie de la troisieme helice de pantp et douee de la propriete de traverser les membranes plasmiques selon un processus energie-independant. Afin de rechercher si l'augmentation de la croissance neuritique observee en presence du peptide etait bien liee a sa penetration et a sa fixation sur les sites canoniques, nous avons produit 3 peptides mutants. Un de ces peptides ne penetre plus dans les cellules, alors que les deux autres toujours capables de traverser les membranes et de s'accumuler dans les noyaux ont perdu leur capacite de fixation sur les sites reconnus par les homeodomaines. Aucun des peptides mutes ne stimule la croissance neuritique. Ces experiences suggerent fortement que certaines proteines a homeodomaine sont effectivement impliquees dans la differenciation morphologique des neurones postmitotiques en culture