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Thèse soutenue

Le domaine c-terminal du produit du gene sdc25 de la levure saccharomyces cerevisiae, un prototype de facteur d'echange des proteines ras

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Auteur / Autrice : PATRICK POULLET
Direction : Michel Jacquet
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
Date : Soutenance en 1992
Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

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Chez la levure saccharomyces cerevisiae, le produit du gene cdc25 stimule, via les proteines ras, la production d'ampcyclique; un indicateur positif de la disponibilite nutritive pour la cellule. Les proteines ras1 et ras2 sont des proteines-liant-le-gtp homologues des oncoproteines ras de mammiferes. La portion 3-terminale du gene sdc25 supprime la letalite associee a l'inactivation du gene cdc25 et induit un phenotype de voie ampc deregulee. Le domaine c-sdc25, code par ce fragment d'adn, possede plus de 45% d'identite avec la portion equivalente du produit cdc25. Surproduit chez escherichia coli, le c-sdc25 stimule, in vitro, l'echange gdp/gtp des proteines ras2 et p21c-h-ras humaine, contrairement au domaine c-terminal du cdc25. Cependant, un produit chimerique des domaines c-terminaux du sdc25 et du cdc25 stimule egalement la dissociation du complexe ras2-gdp. Le c-sdc25 a ete purifie et caracterise: il active la dissociation et l'association des deux nucleotides (gdp et gtp), mais presente une plus grande specificite pour la dissociation du gdp. Nous avons mis en evidence un complexe stable entre la proteine ras2 et ce facteur d'echange en absence de nucleotide dans le milieu. L'etude de l'influence du c-sdc25 sur differentes p21c-h-ras mutees nous a permis d'identifier certaines regions des proteines ras importantes pour leur activation par ce facteur d'echange. Nous avons egalement verifie, in vitro, l'aptitude du c-sdc25 a se substituer au produit cdc25 endogene pour activer l'adenylate cyclase d'extraits membranaires de levure