Detection ultrastructurale des residus carbohydrates dans le stroma corneen du lapin a l'aide des cryotechniques. Aspects methodologiques

Ultrastructural localization of carbohydrate residues in the stromal cornea of rabbits processed by rapid-freezing and freeze-substituted fixation. Methodological aspects

• Auteur / Autrice : SORAYA CHELLALI-MOULESSEHOUL CHELLALI
• Direction : Alexandre Calas
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1992
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Nous avons etudie l'impact de la fixation (physique ou chimique) ainsi que celui du milieu d'enrobage (resines epoxy ou methacryliques) sur la preservation des residus carbohydrates des glycoconjugues du stroma posterieur de la cornee du lapin, a l'aide de trois lectines couplees a l'or: la wga, la con a et la rca i qui se lient d'une maniere specifique respectivement aux residus n-acetyl-glucosamine et/ou acide n-acetyl-neuraminique, alpha-mannose, et beta-galactose. Il ressort de cette etude que l'application du protocole de congelation ultra-rapide suivie de cryosubstitution permet d'obtenir une meilleure reactivite des residus carbohydrates du stroma pour les trois lectines par rapport aux methodes conventionnelles de la microscopie electronique. Cette reactivite est d'autant plus accentuee si dans le milieu de substitution aucun fixateur ni aucun colorant n'est rajoute. Le maximum de reactivite a ete observe lorsque les cornees cryofixees ont ete incluses dans l'epon ou le lowicryl k4m. Le lr white demeure cependant la resine qui n'a pas favorise le marquage