Le récepteur de la neurotensine dans le système nerveux central : purification, ontogenèse, internalisation et colocalisation avec l'endopeptidase 24.16

Neurotensin receptor in central nervous system : purification, ontogenesis, internalization and colocalization with endopeptidase 24.16

• Auteur / Autrice : Joëlle Chabry
• Direction : Jean-Pierre Vincent
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences de la vie
• Date : Soutenance en 1992
• Etablissement(s) : Nice
• Jury : Président / Présidente : Jean-Pierre Vincent
• Jury : Examinateurs / Examinatrices : Michel Lazdunski
• Jury : Rapporteurs / Rapporteuses : Pierre Laduron, Jean-Claude Meunier

Mots clés

Mots clés contrôlés

Neurotensine

Purification

Internalisation (cytologie)

Endopeptidases

Neurones

Mots clés libres

Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Biologie moléculaire et cellulaire

Résumé

La neurotensine est un tridecapeptide isole dans le cerveau et l'intestin des mammifères. L'utilisation de 125ityr3-neurotensine, ligand de haute radioactivité spécifique, a révélé l'existence de deux familles de sites dans le cerveau des espèces murines. Les sites de haute affinité et de basse capacité fixatrice (kd=0,05-0,5 nm, bmax=10-60 fmol/mg de protéines) sont responsables de la transduction intracellulaire du signal neurotensinergique. La fonction des sites de basse affinité (2<kd<8 nm) n'est pas élucidée. Seuls les sites de haute affinité, biologiquement fonctionnels, sont présents dès la naissance dans le cerveau de mammifères. Leur nombre augmente progressivement atteignant une valeur maximale a la fin de la première semaine chez la souris et du premier mois chez l'homme (bmax=250 fmol/mg de protéines). C'est la raison pour laquelle la purification du récepteur de la neurotensine a été entreprise à partir du cerveau de souris nouveau-né. Apres solubilisation à l'état actif et stable par le mélange chas/cholestérol hemisuccinate, le récepteur de la neurotensine est purifie par chromatographie d'affinité. Cette seule étape permet l'obtention, avec un facteur de purification d'environ 30000, d'une protéine de masse moléculaire 100 kda pure a 80%. Cette protéine est identifiée comme étant le récepteur de la neurotensine par marquage covalent de la neurotensine iodée avec un agent chimique de réticulation. Par autoradiographie et immunocytologie sur culture primaire de neurones d'hémisphères cérébraux de souris, nous avons montré une colocalisation étroite entre les récepteurs de la neurotensine et l'endopeptidase 24. 16, une des activités enzymatiques capables de dégrader le peptide. Ces résultats suggèrent que l'endopeptidase 24. 16 est impliquée dans l'activation physiologique de la neurotensine. Par techniques de liaison de la #1#2#5ityr3-neurotensine et autoradiographie sur coupes semi-fines, nous avons mis en évidence l'internalisation de la neurotensine via son récepteur membranaire dans les neurones en culture