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Transformation de Penicillium roqueforti : transmission de marqueurs génétiques au cours du cycle parasexuel
| Auteur / Autrice : | Nathalie Durand |
| Direction : | Michel Fèvre |
| Type : | Thèse de doctorat |
| Discipline(s) : | Sciences |
| Date : | Soutenance en 1992 |
| Etablissement(s) : | Lyon 1 |
| Jury : | Président / Présidente : Michel Fèvre |
Mots clés
Mots clés contrôlés
Résumé
L'hybridation somatique par fusion de protoplastes est une des nombreuses approches utilisees au cours des programmes d'amelioration de souches industrielles de champignons filamenteux. Cette methodologie necessite le marquage genetique des souches parentales afin de selectionner et identifier les produits issus de la fusion. Les marqueurs phenotypiques generalement utilises sont introduits suite a un traitement mutagene. Afin d'eviter la mutagenese, des marqueurs peuvent etre introduits par transformation genetique. Ce travail a pour objectifs la transformation de penicillium roqueforti, l'hybridation somatique de 2 souches transformees et l'etude de la transmission et de la stabilite des marqueurs de transformation au cours du cycle parasexuel. Deux souches ont ete transformees par des vecteurs conferant la resistance a l'hygromycine b (plasmide pan7. 1) ou a la phleomycine (plasmide put771). Les phenotypes de resistance sont stables a la mitose. L'adn transformant est integre au genome du champignon sous forme d'une copie dans le cas des transformants resistant a l'hygromycine, sous forme de tandem pour le plasmide put771. Des protoplastes des deux souches transformees ont ete fusionnes. Des souches diploides issues de la fusion ont ete selectionnees en presence de la double pression de selection. Apres haploidisation, des souches segregantes ont ete isolees; elles se caracterisent par un reassortiment des marqueurs de transformation. Des hybridations de l'adn, apres southern blot, avec les 2 vecteurs pan7. 1 et put771 ont montre que la transmission des phenotypes de resistance au cours du cycle parasexuel s'accompagne de rearrangements des sequences nucleotidiques plus ou moins importants selon le nombre de copies de vecteurs de transformation integrees. La recombinaison peut aussi conduire a l'elimination des marqueurs ou a l'inactivation de leur expression. La presence d'un mecanisme de methylation de certains residus cytosine a egalement ete mise en evidence; ce dernier pourrait participer a l'inactivation des marqueurs. Au cours de cette etude, il a egalement ete montre que l'hybridation somatique s'accompagne d'une recombinaison des proprietes parentales. Les activites proteolytiques et lipolytiques presentant un interet industriel peuvent varier entre les souches parentales et recombinantes et conduire a la creation de nouvelles souches