Recherche Avancée

Thèse soutenue

Mise en culture et caractérisation de cellules épithéliales mammaires bovines en sécrétion : optimisation des conditions de culture

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Auteur / Autrice : Christine Claudon
Direction : François Laurent
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences agronomiques
Date : Soutenance en 1992
Etablissement(s) : Vandoeuvre-les-Nancy, INPL

Résumé

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Parmi les systèmes de culture cellulaire utilisés dans l'étude des régulations de lactogènes, le plus employé est la culture sur collagène flottant de cellules obtenues par dissociation de tissu mammaire d'animaux mi-gestants. Peu d'auteurs parviennent à maintenir des lactocytes secrétant in vitro. Le but de ce travail est la construction d'un modèle permettant 1) le maintien de lactocytes bovins différenciés 2) la recherche de conditions de culture nécessaires a un métabolisme proche de celui observe in vivo 3) l'étude des secrétions protéiques. Diverses méthodes d'isolement des cellules ont été comparées et un protocole adapte au tissu bovin lactant a été élaboré. La suspension de massifs cellulaires obtenue est ensemencée sur gel de collagène fixe ou flottant. L'observation en microscopie optique et le marquage immunofluorescent des cytokeratines montrent le caractère épithélial et sécréteur des cellules ensemencées. En culture les cellules s'organisent en pavage polygonal caractéristique des épithélial. L'analyse des milieux de culture (dosages elisa) montrent que la sécrétion d'alpha s1-caséine et beta-lactoglobuline est maintenue une dizaine de jours, à un niveau plus élevé sur collagène flottant. La technique des chambres de culture a fond poreux a été adaptée a la culture de lactocytes bovins et son utilisation améliore la différenciation morphologique et fonctionnelle des cellules en culture