Biosynthèse de la spiramycine par Streptomyces ambofaciens : régulation de la biosynthèse et caractérisation de l'acétate kinase et des systèmes fournisseurs du malonyl-CoA

Biosynthesis of spiramycin by Streptomyces ambofaciens: biosynthesis regulation and characterization of the acetate kinase and supplyer system of malonyl-CoA

• Auteur / Autrice : Mohamed Laakel
• Direction : François Schneider
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biotechnologies et industries alimentaires
• Date : Soutenance en 1992
• Etablissement(s) : Vandoeuvre-les-Nancy, INPL

Mots clés

Mots clés contrôlés

Enzymes -- Régulation

Biosynthèse

Spiramycine

Streptomyces ambofaciens

Mots clés libres

Kinase

Carboxylase

Déshydrogénase

Malonyl-CoA

Hplc

Résumé

Ce travail se situe dans le cadre d'études sur les relations entre métabolisme primaire et secondaire chez Streptomyces ambofaciens, producteur de spiramycine. L’étude de certains aspects de la régulation de l'acétate kinase (AK) a été réalisée. La présence de certains acides gras (ag) à courtes chaines au cours de la croissance stimule la production de spiramycine, la nature de la source d'azote pouvant contrôler cette production par l'intermédiaire de ces phénomènes acides. La biosynthèse de L'AK en phase stationnaire est sensible à l'ajout d'ag dans le milieu. Elle n'est pas contrôlée par la nature de la source d'azote. Cette enzyme a été purifiée et caractérisée partiellement pendant les deux phases de croissance. Une méthode de dosage des activités enzymatiques impliquant les acyl-CoA a été mise au point (HPLC). Cette méthode a permis l'identification des différentes voies conduisant au malonyl- CoA, intermédiaire commun à la biosynthèse des ag et de l'antibiotique. L’acetyl- CoA carboxylase (ACC) a été étudiée. Au cours de la croissance, sa présence dépend de la source d'azote utilisée: son activité est très faible en phase stationnaire sur milieu avec ammonium, alors qu'elle est beaucoup plus élevée sur milieu avec valine. Cette enzyme a été purifiée et caractérisée partiellement. La régulation de la pyruvate déshydrogénase (PDH) et de l'oxaloacétate déshydrogénase (OADH) par la source d'azote (ammonium ou valine) a été analysée. Sur milieu avec valine, en phase stationnaire, cette étude conduit à montrer que la synthèse de malonyl- CoA, produit à partir de pyruvate ou d'acétate, et carboxyle par l'ACC. Sur milieu avec ammonium, pendant la phase stationnaire la synthèse de malonyl- CoA est due uniquement à l'activité de l'OADH