Vecteurs dérivés du densovirus de Juninia coenia (JCDNV) exprimant sous forme épisomale ou intégrée des gènes étrangers dans les cellules d'insectes

Densovirus-derived vectors for stable expression under episomal or integrated form of foreigns genes in insect cell lines

• Auteur / Autrice : Fabienne Rolling
• Direction : Max Bergoin
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Biologie cellulaire et microbiologie
• Date : Soutenance en 1992
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 2
• Partenaire(s) de recherche : Autre partenaire : Université d'Aix-Marseille II. Faculté des sciences (1969-2011)

Résumé

Nous avons construit deux vecteurs derives du genome clone du densovirus de junonia coenia exprimant le gene de resistance a la neomycine sous controle du promoteur des genes de capside. L'un possede les genes non structuraux (rep) intacts, l'autre est delete des genes rep mais possede des repetitions terminales inversees (itr) intactes. Par transfection de la lignee cellulaire spc-sl 52 par l'un ou l'autre de ces deux plasmides nous avons obtenu sur milieu selectif des clones de cellules transformees dont nous avons analyse l'adn. En presence des fonctions rep le genome viral recombinant s'integre dans l'adn cellulaire vraisemblablement en une seule copie et en un site unique different pour chaque clone analyse, suggerant un mecanisme d'integration non specifique. En absence des fonctions rep, le plasmide recombinant persiste sous la forme d'un replicon autonome dans les cellules transformees sans s'integrer. Les fonctions rep sont donc necessaires a l'excision du genome recombinant. Dans ces deux systemes, integratif ou episomal, le genome viral recombinant se maintient de facon stable en presence ou en absence de pression de selection. Ce resultat demontre la possibilite de developper des vecteurs d'expression stables dans des cellules transformees d'insectes et ouvre la voie au developpement de vecteurs derives de densovirus pour la production d'insectes transgeniques. Par trans-complementation a l'aide d'un plasmide charge d'une sequence virale deletee de ses itr mais possedant les genes rep et cap fonctionnels, on a obtenu le sauvetage du genome viral integre ou episomal et son encapsidation, ce qui confirme le role essentiel des fonctions rep dans le mecanisme d'excision et de replication. Ces resultats ouvrent d'interessantes perspectives de production de virus transducteurs