Recherche Avancée

Thèse soutenue

Optimisation au niveau moléculaire de souches transformées de Tolypocladium geodes pour la sécrétion de deux protéines humaines d'intérêt thérapeutique

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Auteur / Autrice : Michel Baron
Direction : Gérard Tiraby
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Microbiologie
Date : Soutenance en 1991
Etablissement(s) : Toulouse 3

Résumé

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Afin de demontrer les possibilites des champignons filamenteux pour la production de proteines recombinantes, deux modeles proteiques ont ete choisis possedant des applications en therapeutique humaine, le lysozyme et l'erythropoietine humain. Les premiers travaux abordes ont porte sur le developpement d'un systeme de transfert genetique chez t. Reesei et t. Geodes. Ce systeme est base sur l'expression heterologue du gene sh ble conferant un phenotype de resistance aux bleomycines et phleomycines. Afin de developper de nouveaux modeles d'excretion de proteines heterologues, l'activite de la proteine sh en fusion n et c terminale a ete analysee dans des proteines hybrides sh::gal et gal::sh. Dans les deux cas, la double fonctionnalite, activite sh et -gal a ete mise en evidence et correlee a la synthese de la proteine fusionnelle. Les possibilites de production de l'erythropoietine et du lysozyme humain par t. Geodes ont ete analysees. Les methodologies employees sont similaires dans les deux cas: genes synthetiques, vecteurs d'expression bases sur des fusions transcriptionnelles ou traductionnelles avec la proteine sh. L'excretion de la proteine epo par les transformants fongiques n'a pu etre mise en evidence. L'utilisation du modele fusionnel sh::epo a permis d'une part de detecter une synthese intracellulaire, d'autre part d'associer a l'absence de production extracellulaire des evenements proteolytiques affectant la proteine epo. Les resultats obtenus pour la production de lysozyme sont par contre tres positifs, cette proteine etant detectable extracellulairement quel que soit le modele d'expression utilise. Les meilleures productions ont ete observees dans les transformants fongiques exprimant la fusion sh ble::epo