Etude des transferts genetiques chez les corynebacteries : application au clonage et a l'expression d'un gene heterologue

Genetic transfer in corynebacteria: cloning and expression of heterologous gene

• Auteur / Autrice : Sylvie Bonnassié
• Direction : Michel-Armand Sicard
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1991
• Etablissement(s) : Toulouse 3

Résumé

Les corynebacteries occupent une grande variete de niches ecologiques. On distingue parmi ces bacteries les especes productrices d'acides amines. Malgre leur importance industrielle, les connaissances genetiques concernant les corynebacteries sont tres limitees. Nous avons developpe les etudes pour faciliter le genie genetique chez cet organisme. La premiere etape fut l'isolement de mutants devenus incapables de restreindre l'adn phagique ou plasmidique extrait d'hotes etrangers. Les methodes de transformation par protoplastisation etant tres lentes, nous avons developpe un procede efficace d'electrotransformation qui produit 10#6 transformants par g d'adn et peut etre utilise pour des souches recalcitrantes. L'electrotransformation est une technique tres rapide qui inhibe les systemes de restriction-modification. Nous avons clone le gene lyta (amidase) de streptococcus pneumoniae qui est surexprime chez brevibacterium lactofermentum. Cette enzyme est en partie secretee dans le milieu de croissance. Les etudes moleculaires montrent que les experiences de genie genetique peuvent etre menees chez les corynebacteries d'interet industriel