Caracterisation structurale de l'annexine-v. Utilisation comme sonde de l'exposition des phospholipides catalytiques dans les reactions d'activation et de regulation de la coagulation

Structural characterization of annexin-v. Use as a probe for the exposure of catalytic phospholipids in reactions of activation and regulation of coagulation

• Auteur / Autrice : CATHERINE RAVANAT ORGERET
• Direction : Jean-Pierre Cazenave
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1991
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

L'annexine-v possede une forte affinite pour les phospholipides anioniques qui catalysent les reactions de la coagulation. Par consequent, c'est un anticoagulant in vitro. Ceci nous a conduit a utiliser l'annexine-v comme sonde de detection de ces phospholipides. Afin de la valider dans sa fonction de sonde nous avons caracterise le complexe annexine-v/phospholipides sur un plan structural et stchiometrique par diffusion de neutrons et par cristallographie electronique. Puis, nous avons montre que l'annexine-v etait un puissant inhibiteur, en systeme purifie, de l'activite procoagulante facteur tissulaire, de l'activite anticoagulante thrombomoduline et de l'expression de l'activite de la proteine c activee. La contribution des phospholipides anioniques dans ces reactions est ainsi demontree. Nous avons ensuite evalue le role des phospholipides anioniques dans les activites facteur tissulaire et thrombomoduline a la surface de la cellule endotheliale. L'activite thrombomoduline est peu affectee par l'annexine-v que la cellule endotheliale soit stimulee ou non et l'activite facteur tissulaire est inhibee de 80% par de fortes concentrations en annexine-v. Ceci suggere que la contribution des phospholipides est mineure dans l'activite thrombomoduline de la cellule endotheliale ou bien que la conformation de la thrombomoduline est differente en systeme purifie et en systeme cellulaire. Ceci suggere aussi que les environnements lipidiques de la thrombomoduline et du facteur tissulaire sont differents a la surface de l'endothelium