Contribution a la mise au point d'une methode de transfert de genes par hybridation somatique asymetrique chez le melon (cucumis melo l)

Contribution to the development of a method for gene transfer through asymmetric somatic hybridization in muskmelon (cucumis melo l. )

• Auteur / Autrice : Isabelle Debeaujon
• Direction : Michel Branchard
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1991
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

Un protocole conduisant a la regeneration de plantes entieres a partir de protoplastes (p) de melon (cucumis melo) cantaloup charentais est decrit. Les protoplastes sont isoles a partir de feuilles et de cotyledons preleves sur des plantes cultivees in vitro. La sequence de culture comprend quatre milieux (m) destines a l'induction des divisions des protoplastes (m. 1), a la croissance des microcolonies (m. 2), a l'induction morphogenetique (m. 3) et au developpement des structures neoformees (m. 4). L'inclusion des protoplastes dans l'agarose ameliore les taux de viabilite et de divisions. Ces derniers, releves apres 14 jours de culture en m. 1 a une densite de 10#5 p. Ml##1, sont en moyenne de 60% et 30% quel que soit l'organe. La modulation de l'equilibre auxine/cytokinine exogene au niveau du m. 3 permet d'orienter la morphogenese vers une embryogenese somatique (4,5 m de 2,4-d et 0,4 m de bap) ou une caulogenese (2,2 m de bap et 2,3 m de kin). Le maltose se montre superieur au saccharose pour le developpement des nodules caulogenes en bourgeons sur m. 4. Des conditions d'electrofusion de protoplastes de c. Melo avec des protoplastes de c. Metuliferus ou de cucurbita pepo prealablement irradies aux rayons gamma ont ete mises au point. Trois plantes tetraploides ont ete regenerees a l'issu d'une experience de fusion entre c. Melo et c. Metuliferus. Leur morphologie ainsi que les zymogrammes des peroxydases, de la glutamate oxaloacetate transaminase, de la phosphoglucomutase et de la malate deshydrogenase sont identiques a ceux du parent melon. Les origines possibles de ces plantes sont discutees