Caracterisation physico-chimique et immunochimique du domaine anionique n-terminal de l'actine erythrocytaire humaine, en solution et in situ

Immunochemical and physico-chemical characterization, in solution and in situ, of the n-terminal domain of the human erythrocyte actin

• Auteur / Autrice : IHSANE LEBBAR-KAABI
• Direction : Robert Cassoly
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1991
• Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

Le segment n-terminal de l'actine, forme des 12 premiers acides amines represente un domaine fonctionnel particulierement important de la proteine puisqu'il est implique dans la fixation de tres nombreuses proteines associees. L'etude de son accessibilite au solvant a fait l'objet de nombreux travaux. Nous avons examine cette question par une methode entierement originale en utilisant la desoxyhemoglobine comme proteine sonde. Nous montrons que l'actine (gouf) forme un complexe de forte affinite avec la desoxyhemoglobine. Le site de fixation du 2,3-dpg a l'hemoglobine et le domaine n-terminal anionique de l'actine sont impliques dans cette association. Un tetramere d'hemoglobine est fixe par monomere d'actine, ce qui n'influe par la vitesse de polymerisation de l'actine mais provoque par contre la fragmentation des filaments. L'accessibilite de ce domaine n-terminal a ete egalement etudiee, in situ, au niveau des protofilaments d'actine du squelette membranaire erythrocytaire, apres avoir confirme que l'actine erythrocytaire etait formee d'un melange d'isoformes beta et gamma, et prepare des anticorps polyclonaux diriges contre les peptides synthetiques correspondant aux huit premiers acides amines des isoformes beta et gamma cytoplasmiques. Dans les fantomes d'erythrocytes prepares en presence de mg#2#+, l'actine fixe les anticorps anti-actine. Cette fixation augmente apres traitement des fantomes au triton x100. Elle est plus forte encore quand les membranes d'erythrocytes sont depourvues de mg#2#+. Ces resultats montrent que dans l'erythrocyte, l'extremite n-terminale de l'actine des protofilaments est accessible et que l'empechement sterique lie a l'environnement membranaire et cytosolique des protofilaments influence cette accessibilite. Par des experiences immunochimiques similaires, faites en presence du sous-fragment s1 de myosine, on demontre que l'actine dans les membranes d'ery