Recherche Avancée

Thèse soutenue

Etude de la flexibilite et du repliement de la phosphoglycerate kinase de levure a l'aide de mutants possedant une cysteine

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Auteur / Autrice : NATHALIE MOUDJOU BALLERY
Direction : JANINE YON
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
Date : Soutenance en 1991
Etablissement(s) : Paris 11

Résumé

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Le travail presente dans ce memoire concerne l'etude des fluctuations conformationnelles de la phosphoglycerate kinase de levure. Celles-ci ont ete caracterisees a l'aide de la reactivite chimique de sondes intrinseques: des cysteines introduites par mutagenese dirigee. Plusieurs mutants, contenant chacun une cysteine a une position externe ou interne, ont ete obtenus a partir d'un mutant pour lequel l'unique cysteine de la proteine sauvage (97) a ete remplacee par une alanine. Il a ete verifie a l'aide de deux signaux, l'activite enzymatique et le dichroisme circulaire, que les mutations n'ont pas engendre de perturbation notable de la structure, de l'activite et de la stabilite de l'enzyme. La variation de reactivite chimique vis-a-vis du nbs2 ainsi que la variation d'environnement d'une sonde fluorescente, l'aedans, fixee sur les cysteines externes ont ete etudies lors de la fixation des substrats. Des fluctuations conformationnelles ont ete clairement detectees dans la crevasse separant les domaines. Leur importance au cours du processus catalytique a ete mise en relief. Le processus de denaturation-renaturation a ete suivi a l'aide du signal dichroique et de la variation d'accessibilite des cysteines internes au nbs2 dans des conditions d'equilibre et au cours d'etudes cinetiques. Un intermediaire a ete mis en evidence puis caracterise. A l'interieur de cette espece, qui semble posseder les caracteristiques d'un molten globule, les deux domaines sont replies sans que les interactions qui les relient dans la forme native soient mises en place