Conception d'une molecule pour l'etude de l'internalisation dans les cellules vivantes. Double marquage fluorescent de la ricine

Conception of a molecule for its internalisation study in living cells. Double fluorescent labelling of ricin

• Auteur / Autrice : FLORENCE EMMANUEL
• Direction : Annette Alfsen
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1991
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

Dans le but de suivre les voies d'endocytose d'une molecule toxique: la ricine, il apparaissait necessaire de concevoir une molecule signal dont les differentes etapes de penetration et de cheminement pourraient etre reperees dans la cellule. Cette these presente la mise au point d'une methode simple et rapide de separation des chaines de la ricine, le marquage de ces chaines par des sondes fluorescentes differentes: dansyl (d) pour la chaine a et fluoresceine (f) pour la chaine b, et leur reassociation conduisant a la formation de trois types de molecule de ricine fluorescente: deux monomarquees (ab#f et a#db) et une doublement marquee (a#db#f). Les chaines marquees libres et les molecules de ricine fluorescente ont ete etudiees par spectroscopie d'absorption et de fluorescence, leurs activites biologiques sont conservees. Une approche de l'etude de l'internalisation de la ricine par les cellules d'hepatome de zajdela a ete realisee par videomicrofluorimetrie en utilisant la molecule ab#f. Cette etude a conduit a la mise en evidence de deux populations cellulaires fixant differemment la ricine