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Thèse soutenue

Etude du comportement d'hybridomes en réacteurs dans un milieu défini : effet des suppléments (acides aminés, insuline, lipides) en cultures discontinues et continues

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Auteur / Autrice : Adèle Martial
Direction : Annie Marc
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Génie des procédés
Date : Soutenance en 1991
Etablissement(s) : Vandoeuvre-les-Nancy, INPL

Mots clés

FR

Mots clés contrôlés

Cultures cellulaires
Hybridomes

Mots clés libres

Hybridomes
Réacteurs
Milieu défini
Facteurs de croissance
Cinétiques
Cultures continues

Résumé

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Ce travail a eu pour objectif principal l'étude des relations entre des cellules d'hybridomes cultivées en réacteur agité et leur environnement, lorsque le milieu utilisé est exempt de sérum animal et complètement défini. Une première étape a été la mise au point rapide d'un tel milieu au moins aussi performant qu'un milieu avec sérum. Cette étape a été réalisée dans des systèmes de culture statiques puis validée avec des systèmes agités. La deuxième partie comprend une approche cinétique essentielle de facteurs de croissance encore peu décrits, Comme la transferrine, l'insuline, le fer, l'acide ascorbique, les acides aminés et les lipides. A partir d'études détaillées en réacteurs discontinus et continus, des phénomènes intéressants et originaux sur les besoins des cellules et leur sensibilité à l'environnement biochimique ont été mis en évidence. En cours de culture, la transferrine n'évolue pas, l'acide ascorbique augmente et l'insuline diminue. A trop forte concentration, l'insuline inhibe la croissance. Les besoins en acides aminés ont et quantifiés en détail avec une observation de l'effet du sérum. Une modification de l'apport lipidique, sous forme de liposomes, perturbe transitoirement le comportement métabolique des cellules. Dans la dernière partie, ces résultats ont été validés par rapport à l'utilisation d'un tel milieu pour la production. Des simplifications ont été réalisées pour atteindre une composition protéique très faible de 0,1 g/l. Une attention particulière a été apportée à la caractérisation des cellules (viabilité et lyse) et des produits (structure générales) dans ce milieu sans sérum