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Thèse soutenue

Test de diagnostic rapide en une étape par immunochromatographie : détection de la progestérone au moyen de deux types de marqueurs, la phosphatase alcaline et les microparticules colorées

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Auteur / Autrice : Nathalie Leygues
Direction : Gérard Somme
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Génie Enzymatique, Bioconversion et Microbiologie
Date : Soutenance en 1991
Etablissement(s) : Compiègne
Ecole(s) doctorale(s) : École doctorale Sciences pour l'ingénieur (Compiègne)

Résumé

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Les tests d'immunodiagnostic évoluent vers une simplification extrême. Certains d'entre eux sont mis en œuvre à l'aide d'un automate, d'autres ne nécessitent pas d'équipement et l'interprétation des résultats s'effectue en quelques minutes (tests rapides unitaires). Le test en une étape, ou la seule manipulation consiste en un dépôt de l'échantillon, représente la génération ultime du diagnostique rapide. Le modèle par immunochromatographie consiste en une migration le long d'un support, du réactif immunologique marqué vers les autres immobilisés sur le même support. Ce principe permet l'absence d'étape de lavage. On a choisi un dosage par compétition. Le système est développé sur le modèle de la progestérone pour un test de diagnostic de non gestation chez la vache. Pour ce qui concerne cette application, la rapidité du résultat est essentielle car il laisse la possibilité à l'éleveur, le cas échéant, de reinséminer l'animal sans attendre le cycle suivant. Les technologies de base qui serviront au développement d'un test rapide en une étape par immunochromatographie pour la détection de la progestérone, ont été mises au point. L'haptène (progestérone) est immobilisé sur la membrane via une molécule porteuse. L'anticorps spécifique de la progestérone est marqué soit par une enzyme, la phosphatase alcaline, soit par des microparticules de polystyrène colorées (latex). Le conjugué (anticorps marqué) est déposé et séché sur le support. Grâce à l'étude détaillée du traitement du support et des paramètres de la réaction immunologique (choix de la molécule porteuse, conditions de couplage de la progestérone, techniques de conjugaison, purification de l'enzyme libre, conditions d'immobilisation de la progestérone et de dépôt du conjugué) des solutions ont été développées pour permettre la migration complète du conjugué sur le support et la spécificité de la réaction du conjugué sur l'antigène immobilisé. Les solutions mises au point dépendent du type de marquage de l'anticorps.