Structure et fonction des [alpha]-amylases de porc et d'orge : étude par protéolyse limitée et action des anticorps polyclonaux

Structure and function of porcine and barley alpha-amylase : effect of limited proteolysis and binding to polyclonal antibodies

• Auteur / Autrice : Véronique Desseaux
• Direction : Guy Marchis-Mouren
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Nutrition, aspects cellulaires et moléculaires
• Date : Soutenance en 1991
• Etablissement(s) : Aix-Marseille 3
• Partenaire(s) de recherche : Autre partenaire : Université Paul Cézanne. Faculté des sciences et techniques de Saint-Jérôme (Aix-Marseille)

Mots clés

Mots clés contrôlés

Orge

Porc

Amidons

Enzymes digestives

Amylases

Résumé

Les alpha-amylases catalysent l'hydrolyse des liaisons alpha-1,4 internes de l'amidon et de ses derives. Nous nous sommes attaches a comprendre les evenements moleculaires qui precedent (attachement, introduction dans le site catalytique), et suivent l'hydrolyse proprement dite. La structure de l'amylase de porc est connue a 2-2,9 a de resolution. Cette molecule (55 kd) comprend un corps central ab(tonneau) et un petit domaine c distinct. Le tonneau contient le site catalytique. Le domaine c participe avec (a) a un 2eme site de fixation du substrat (site surface). Notre but a ete d'etudier le role du site surface et du domaine c dans l'action amylolytique. Nous avons utilise 3 approches: 1) l'etude de la vitesse d'hydrolyse du p. Nitrophenylmaltoside en fonction du ph; 2) la proteolyse; 3) l'effet des anticorps sur l'activite enzymatique. Nos resultats sont en faveur de la participation de residus carboxylates au site catalytique. L'amylase d'orge est plus resistante a la proteolyse que l'amylase de porc. La coupure proteolytique ne se fait pas a la charniere comme attendu mais sur la derniere boucle du tonneau. La proteolyse provoque une perte d'activite et les fragments separes sont inactifs. Des anticorps anti-domaine c et anti-ppa ont ete purifies. Les anti-ppa inhibent l'hydrolyse des longs substrats tandis que l'hydrolyse du p. Nitrophenylmaltose n'est pas inhibee. Notre conclusion est que l'attaque proteolytique peut modifier l'environnement du site surface et la structure du centre actif. L'inhibition par les anticorps indique l'importance du site surface dans l'hydrolyse des chaines polyglucosidiques devant se fixer avant de se positionner correctement au centre actif. Cette etude montre egalement que les deux domaines aba et c sont fortement lies