Elaboration et caractérisation d'un nouveau type de vecteurs de clonage à nombre de copies régulable

Construction and characterization of a new type of copy number-regulated cloning vector

• Auteur / Autrice : Dominique Gil
• Direction : Jean-Pierre Bouche
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Microbiologie
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Toulouse 3

Mots clés

Mots clés contrôlés

Plasmides

Vecteurs de clonage

Résumé

L'integration de plasmides en des points predetermines du chromosome d'escherichia coli, et les possibilites ainsi offertes: cartographie, etude de l'activite des genes ou des effets du contexte nucleoidique, clonage ou echange d'alleles, prise en charge de la replication par le plasmide integre, sont realisables a l'aide d'outils distincts aux possibilites limitees. L'objet de cette etude a ete la mise au point d'un plasmide vecteur a replication regulee par l'operateur de maniere thermo-independante. Le replicon de depart a ete cole1, tandis que le systeme lac a servi a l'asservissement du nombre de copies. Le chapitre 1 decrit la derivation d'un vecteur, pam9, a partir d'un plasmide a replication dependante du promoteur lacuv5. Pam9 peut s'integrer par homologie et prendre en charge la replication du chromosome. Toutefois, pla51 et ses derives apparaissent n'exister qu'a l'etat trimerique, ce qui en limite l'utilite. Le chapitre 3 decrit la construction de nouveaux vecteurs a nombre de copies modulables, pam34 et pam35, portant la region regulatrice de l'operon lac substitue au promoteur de l'arn ii amorce, et conservant les elements regulateurs rnai-rnaii et rom. Le chapitre 4 porte sur la replication de ces plasmides. Celle de pam34, porteur de lacl, est strictement dependante de la presence d'inducteur. Ceci permet la selection de l'integration du plasmide au chromosome, la prise en charge de sa replication, et le clonage par recurrence de region proches. J'ai montre aussi que pam34 est un agent efficace pour la chasse de vecteurs de meme incompatibilite. Les proprietes de pam34 permettent son emploi pour diverses manipulations genetiques et pour les etudes de la replication du chromosome et du cycle cellulaire. Ces perspectives sont abordees dans la discussion finale