Contribution a l'etude de la structure tertiaire des trna et interaction avec les aminoacyl-trna synthetases. Utilisation de sondes chimiques et analyse de variants du trna#a#s#p de levure

Contribution to the study of tertiary structure of the trnas and interaction with the aminoacyl-trna synthetases using chemical probes and yeast trna#a#s#o variants

• Auteur / Autrice : Angela Garcia-Brugger
• Direction : Richard Giegé
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées
• Date : Soutenance en 1990
• Etablissement(s) : Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)

Résumé

Ce memoire traite de la structure tertiaire des trna et de leur interaction avec les aminoacyl-trna synthetases. Plusieurs problematiques ont ete abordees d'un point de vue structural, a l'aide de sondes chimiques de structure tertiaire, et d'un point de vue fonctionnel en utilisant des variants du trna#a#s#p de levure. Le premier aspect developpe concerne les sondes de structure. La reactivite de composes possedant des groupements diazoniums photoactivables a ete mise au point sur le trna#a#s#p de levure. L'un de ces composes est un analogue de la spermine, il a permis de localiser celle-ci sur le trna. Le deuxieme probleme aborde est relatif a la structure tertiaire de deux trna#m#e#t, ceci en relation avec leur role fonctionnel. Des differences interessantes ont ete observees dans la conformation de chacun d'eux. L'intervention de structures particulieres dans la reconnaissance entre rrna et synthetase, tel le grand bras variable du trna#s#e#r, a ete etudie par cartographie du trna complexe a la serrs de levure, montrant que ce bras est en contact avec la synthetase. Par ailleurs, la cartographie du trna#a#s#p dans le complexe trna#a#s#p/asprs a egalement ete realisee a l'aide de diverses sondes chimiques donnant une topographie d'interaction du trna suivant la face comprenant la boucle variable et suivant l'angle interne du l du trna. La grande importance de la region de l'anticodon a ete demontree a l'aide de sondes mais egalement par analyse des parametres cinetiques de variants aspartiques mutes dans cette region et peu reconnus par la synthetase. L'utilisation de variants aspartiques, obtenus par transcription in vitro et ne possedant pas de bases modifiees, a souligne l'importance de ces dernieres en tant qu'antideterminants pour la discrimination par d'autres synthetases, et en particulier par l'argrs de levure